【摘 要】
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小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)是大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)的一员,由禾谷多黏菌进行传播。小麦黄花叶病毒的核内涵体蛋白(nuclear inclusion b,NIb)是
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小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)是大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)的一员,由禾谷多黏菌进行传播。小麦黄花叶病毒的核内涵体蛋白(nuclear inclusion b,NIb)是一个含有保守Gly-Asp-Asp(GDD)模体的蛋白,被认为是病毒依赖于RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNApolymerase,Rd Rp)。本研究以WYMV的NIb为探究目标,捕获与之相互作用的寄主靶标蛋白。随后通过一系列分子实验探究NIb在WYMV侵染植株过程中发挥的作用。主要研究结果如下:首先,通过酵母系统得到12个可能与NIb互作的寄主蛋白。考虑到光诱导蛋白(Triticum aestivum light induced protein,LIP)被重复筛选的次数较多,故挑选其进行后续实验。随后,经由酵母双杂交、双份子荧光互补(Bi FC)和体内免疫共沉淀(COIP)技术分别验证了NIb和Ta LIP在植物体内/外的互作干系。并且亚细胞定位实验进一步分析发现NIb与Ta LIP互作会改变它们各自的定位。然后,利用BSMV介导的VIGS技术在小麦植株中对Ta LIP进行瞬时沉默分析。通过荧光实时定量PCR(q RT-PCR)筛选沉默显著的小麦植株后进行WYMV的接毒实验。结果表明,沉默了Ta LIP的小麦植株(BSMV:Ta LIP)对WYMV表现出更加敏感。最后,利用LC-MS进行植物激素含量的对比分析,结果发现BSMV:Ta LIP植株中ABA的含量显著减少。另外,外源喷施ABA实验发现,ABA能够诱导小麦植株中Ta LIP的m RNA显著上调表达。q RT-PCR结果也表明,在BSMV:Ta LIP的小麦植株中,ABA信号通路基因wheat abscisic acid insensitive 5(Ta ABI5),abscisic acid insensitive 8(Ta ABI8),pyrabatin resistance 1-Llike(Ta PYL1)和pyrabatin resistance3-Llike(Ta PYL3)的m RNA水平也受到了抑制。综上结果表明,WYMV的NIb通过与Ta LIP相互作用,改变其在植物细胞中的定位,干扰Ta LIP的正常功能,抑制ABA信号通路,从而促进WYMV的侵染。
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