目的 观察骨融合式牙种植体与骨髓基质成骨细胞(marrow stromal osteoblast，MSO)及松质骨基质(cancellous bone matrix，CBM)支架复合植入无免疫动物体内后新骨的形成及与种植体的愈合情况。 方法 首先选用3月龄新西兰兔2只，髂骨、膝关节取材，去净周围软组织、骨膜及表面软骨，经脱钙、去除脂类和免疫活性蛋白成分系列化处理后，制备成近圆柱状的CBM备用。再选用3周龄新西兰兔6只，处死后无菌条件下取髂骨及长骨松质骨；去净周围软组织、骨膜及表面软骨，充分剪碎，DMEM培养液冲洗，轻轻吹打；取上清直接添加诱导液培养、诱导和扩增，3d换液一次，使细胞向成骨细胞转化，形成MSO；倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况。MSO汇合后以胰酶消化，离心后收集细胞并计数；细胞接种于海藻酸钠溶液中(细胞终浓度为5×10~7／ml，海藻酸钠终浓度为1％)，充分混匀后接种到风干CBM和种植体的表面，在每块材料上接种约1×10~7细胞；待CBM润湿膨胀充分后，滴加氯化钙，使藻酸盐固化，形成CBM-藻酸盐-MSO复合物(MCCAB)与种植体的复合体。然后再选用12只裸鼠(BALB／L，雄性，5～6周，20～22g)随机分为两组；实验组6只裸鼠左侧背部皮下植入MCCAB与种植体的复合体，对照组6只裸鼠右侧背部皮下植入CBM-藻酸盐复合物与种植体的复合体。植入后4、8周取材，通过大体标本观察、X线片检查、组织学观察和组织学定量分析等方法评价新骨形成情况。所得数据进行团体检验。 结 果 骨髓基质细胞（mesenchxmal stem cells，MSq24h开始贴壁，48h开始伸展为梭形、三角形和多角形，胞浆丰富，胞核圆而居中，l－2个核仁；原代MSC在诱导液中生长，表现为群体倍增时间延长（约为66hX但集落状生长明显，细胞常围绕集落中央成岛状并放射状排列；8－10d后细胞融合成单层，未发生细胞间的接触抑制现象，13叫5d时其细胞体积明显增大，呈重叠生长并分泌大量基质而长满培养皿，培养皿底部出现肉眼可见的白色矿化结节；直径为 10 cm培养M，每M可收获细胞数约 3－5 x 10‘个。实验组植人后4周，标本的外观为红白相间／线摄片观察可见明显成骨，表现为X线阻射影像，标本周围阻射强度及面积大于放置种植体的中央区，种植体周围有较多X线透射影；组织学观察表明，标本CBM部分吸收，表层有类骨组织和新骨形成，但无板层结构，成骨细胞较多，位于骨陷窝内，胞体呈椭圆形，胞浆丰富，呈嗜碱性，兼有膜内成骨和软骨成骨特征，后者表现为软骨细胞增生J大，软骨形成及软骨内骨化，标本内层亦有散在局灶性编织骨形成，总体观察以膜内成骨为主；磨片镜下可见，标本表层及中心均有大量片状新骨形成，同时可见较多软骨岛，部分区域可见新骨与种植体发生结合，表现为新骨长人种植体的螺纹中。植人后8周，标本表面光滑，为暗红色J线摄片观察可见成骨量增加，表现为X线阻射的强度和面积增加，且标本浅层、深层和放置种植体的中央区均可见骨形成征象，新骨的密度与裸鼠自体骨相近，种植体周围大部分为X线阻射影；组织学观察表明，标本CBM大部分吸收，表层及中心均有新骨形成，相互连接形成板层骨，成骨细胞位于骨陷窝中，胞体仍呈椭圆形，但体积小于上述类骨质中的成骨细胞，周围有大量骨基质成淡紫色，局部可见软骨细胞存在，以膜内成骨为主；磨片镜下可见，植人8周后，实验组标本中形成的新骨较为均 ·2·匀一致，种植体与新骨间愈合良好。对照组为负载骨融合式牙种植体的单纯CBM植人组，植人后4在周，植人物的外观仍为白色；种植体周围基本为X线透射影，透光度与周围软组织相似，仅CBM边缘可见线状X线阻射影，成骨作用不明显；组织学观察表明，对照组标本仅表层见少量新骨形成，为软骨成骨；而标本内层因无新骨形成，未与种植体发生结合，故不能制成磨片。实验组与对照组在标本及种植体周围均未见软组织长人。对于植人的同期标本进行大体观察发现，实验组标本硬度明显高于对照组，且随时间延长实验组标本硬度呈现明显递增趋势，而对照组硬度则稍有增加。图像分析结果表明，在植人相同时间内，实验组成骨量明显高于对照组，统计学上差异显著（P＜0．O门；对于实验组或对照组，随植人时间延长成骨量亦明显增加，统计学上差异显著什＜0．01）。 结 论 1．按目前学术领域普遍接受的方法，我们直接以诱导培养液培养、扩增、诱导MSC，可以在较短时间内（原代培养2周）获得大量高分化的MSO用于接种，表明这是一种收获种子细胞的有效手段。 2．MSO可以作为良好的骨组织工程种子细胞，它具有取材方便、培养简单、倍增迅速、定向分化、成骨力强等特点。 3．CBM作为骨组织工程支架材料，它具有多孔网状结构、良好的骨诱导活性和生物相容性，可以发挥骨诱导性和骨传导性双重特性。 4．实验组兼有膜内成骨和软骨内成骨的特点，以前者为主；对照组为软骨内成骨；实?