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肌肉发育状况直接影响畜禽生产效率,肌内脂肪(IMF)含量是影响肉品质的重要因素。本研究采用绝对和相对定量(iTRAQ)蛋白质组技术检测北京油鸡(BJY)整个生长期胸肌中蛋白质表达谱,对肉鸡不同发育阶段肌肉发育和肌内脂肪代谢的分子机制进行深入研究。本试验包括三部分内容：试验一：利用蛋白质组学技术筛选北京油鸡胸肌组织中四个生长阶段的差异表达蛋白。选用1日龄北京油鸡40只,随机分为4组,分别在1日龄(出雏)、56日龄(快速生长期)、98日龄(上市日龄)、140日龄(性成熟期)屠宰一组,提取鸡胸肌的总蛋白,构建不同日龄的蛋白混合池并进行iTRAQ检测。结果表明：1)鉴定到517个蛋白,可定量的蛋白494个,210个显著下调,210个显著上调。2)通过分层聚类分析,发现在56日龄和98日龄蛋白表达水平相近,140日龄次之,1日龄最远；1日龄蛋白质表达水平与其他三个时期差异很大。试验二：北京油鸡肌肉发育相关的差异表达蛋白及分子机制研究。试验动物同试验一。利用蛋白表达谱数据和屠体数据,进行生物信息学和关联分析筛选肌肉发育相关的关键蛋白和信号通路,利用Western Blotting(WB)技术进行验证。结果发现：1)1到98日龄是北京油鸡肌肉发育的主要阶段。2)初补确定GYGl、HNRNPK、LOC418811、MDH1、pjk、ANXA2、CAPNs1、 CFL2.PDLIM3.MYOZ3是胸肌肌肉发育的关键调控蛋白。3)结合KEGG富集分析和前人的研究报道,初步确定在1至56日龄肌肉发育的分子机制是：①第二信使Ca2+对CALM、CAPNs、 TTN、TnC等的调节作用,促进细胞骨架蛋白的增加以及肌肉收缩,从而使肌肉肥大。②泛素—蛋白酶体系统蛋白的高表达使细胞内的蛋白质降解,使肌肉肥大。4)56至98日龄肌肉发育的调控机制是：①ECM受体对焦点粘连、紧密连接、肌动蛋白调节及心肌肥大的调控,促进细胞骨架蛋白的合成和肌肉的肥大。②ANXA2的增加促进肌动蛋白细胞骨架的动态分子形成以及细胞粘连,DES的下降导致肌肉收缩进一步加强,最终导致肌肉不断肥大。5)综合以上结果,初步确定焦点粘连、肥厚型心肌病、扩张型心肌病信号通路是肌肉发育过程中重要的信号通路,其中泛素一蛋白酶体系统、Ca2+_CALM、ECM复合物、ANXA2等调节是肌肉发育的关键分子机制。试验三：北京油鸡IMF沉积相关的差异表达蛋白及分子机制研究。试验动物同试验一。利用蛋白表达谱数据和脂肪表型数据,进行生物信息学和关联分析筛选IMF脂肪代谢相关的关键蛋白和信号通路,并用WB技术进行验证。结果发现：1)1日龄时,脂肪在肝脏、胸肌、腿肌的含量显著高于其他三个日龄(P<0.05),56日龄后脂肪在肝脏、胸肌、腿肌的沉积随日龄的增加而显著增加(P<0.05)。2)利用生物信息学和关联分析,确定ACAA2、APOA1、ANXA2、RAB5C是调控脂肪代谢的最为关键的节点蛋白。3)结合KEGG富集信号通路分析和前人研究,初步确定不同发育阶段肌内脂肪形成分子机制：出雏时主要来自于卵黄囊膜中富含胆固醇脂的脂蛋白；1至56日龄这一时期脂肪的沉积,主要源于胸肌组织自身的脂肪合成以及脂肪细胞的增殖分化；56至98日龄,[MF沉积主要是ANXA2、ECM复合物介导焦点粘连、紧密连接、肌动蛋白细胞骨架调节信号的调节；98至140日龄,脂肪在胸肌的沉积主要是胸肌组织从肝脏转运脂类的能力增强,而脂肪酸氧化能力的降低的结果。3)综上,初步确定脂肪酸代谢途径、PPAR通路是调控脂类代谢的主要途径,ANXA2及ECM复合物介导焦点粘连、紧密连接、肌动蛋白细胞骨架调节及心肌肥大途径在IMF沉积中起到最重要的作用。综合试验二和试验三的分析结果,初步确定ACAA2、ANXA2、GYG1、LOC418811、MDH1、pfk是共同调控北京油鸡肌肉发育和脂类代谢的关键蛋白；ANXA2、ECM复合物以及ECM复合物介导的肌动蛋白细胞骨架调节信号相关通路是肌肉发育和IMF代谢过程最重要的调控通路。