论文部分内容阅读
目的:探讨LSD1(组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1)在急性肾损伤(AKI)后肾纤维化发生发展过程中的保护作用。方法:30只SD大鼠随机分为:对照组、AKI 1d组、AKI 1周组、AKI 2周组、AKI 4周组、AKI 8周组,每组5只;对照组SD大鼠切除左侧肾脏,右肾不做处理,AKI 1d组、AKI 1周组、AKI 2周组、AKI 4周组、AKI 8周组SD大鼠切除左侧肾脏后,夹闭右侧肾蒂40min后开放,分别在1天、1周、2周、4周、8周后心脏采血并处死大鼠留取肾组织。将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为:对照组、AKI组、AKI+空质粒组、AKI+LSD1过表达组,对照组:正常培养的HK-2细胞;AKI组:HK-2细胞缺氧培养12h后正常培养1h;AKI+空质粒组:HK-2细胞转染空白质粒后缺氧培养12h正常培养1h;AKI+LSD1过表达组:HK-2细胞转染LSD1质粒后缺氧培养12h正常培养1h。应用荧光定量PCR及Western印迹技术检测肾组织及HK-2细胞中LSD1、H3K4me1、H3K4me2及TGF-β1及纤维化指标Col3α1、α-SMA的表达,观察AKI后肾纤维化发生发展过程中LSD1表达、组蛋白甲基化情况及其变化对纤维化的影响;应用染色体免疫共沉淀(Ch IP)技术检测各组HK-2细胞中TGF-β1启动子上H3K4me1及H3K4me2的表达,探索LSD1对肾脏纤维化影响的具体机制。结果:动物实验中,与对照组相比,AKI 1、2、4、8周组纤维化指标Col3α1、α-SMA均明显升高(均P<0.05),TGF-β1、LSD1及H3K4甲基化标志物H3K4me1表达均增多(均P<0.05),H3K4me2仅在AKI 2周组及AKI 4周组升高(均P<0.05),而AKI 1d组较对照组差异无统计学意义(P>0.05);细胞实验中,与AKI组、AKI+空质粒组相比,AKI+LSD1过表达组纤维化指标Col3α1、α-SMA明显下降,TGF-β1、H3K4me1及H3K4me2表达均下降(均P<0.05);细胞实验中,与对照组相比,AKI组及AKI+空质粒组TGF-β1启动子上H3K4me1及H3K4me2表达增加(均P<0.05);与AKI组及AKI+空质粒组相比,AKI+LSD1过表达组TGF-β1启动子上H3K4me1及H3K4me2表达明显下降(均P<0.05)。结论:LSD1通过引起H3K4me1及H3K4me2去甲基化使TGF-β1表达下降,从而在AKI后肾纤维化中起保护作用。