乙型肝炎病毒（HBV）感染是全世界最重要的公共卫生问题之一，严重危害人类健康。尽管HBV疫苗已经使用了很多年，但是全世界仍有大约4亿人口发生HBV慢性感染，其中相当一部分人会发生肝硬化以及肝癌。HBV是一种嗜肝DNA病毒，其感染具有明显的种属特异性，使得HBV的易感宿主范围很狭窄。由于病毒吸附以及DNA转录和复制对宿主有严格的要求，HBV只能感染人和黑猩猩的肝组织。由于对HBV的研究缺乏合适的细胞或动物模型而受到一定限制，人类不能全面了解HBV感染人体后所产生的一系列生理病理变化的机制。因此，建立适合的HBV细胞模型非常重要，不仅对研究HBV的生物学特性、感染机制、发病机制、免疫机制、致癌机制及其与细胞间相互作用提供条件，而且对耐药株的研究和抗病毒药物的筛选、疗效评价和毒性研究有重要帮助。　　 由于HBV体外感染细胞的感染率和检测灵敏度都很低，因此需要建立一种便于检测且灵敏度高的细胞模型。本研究通过共转染HBV1.3倍体质粒和携带Luciferase报告基因的HBV假病毒载体，生产出包裹Luciferase报告基因的HBV假病毒，然后感染肝癌细胞，通过检测报告基因Luciferase在细胞内的表达情况反映HBV的感染水平，从而建立一种新型的检测灵敏度高的HBV细胞模型。首先对HBV1.3倍体转染细胞上清中的病毒进行鉴定和性质分析，通过转染GFP质粒比较不同肝癌细胞的转染效率和转染不同HBV1.3倍体质粒比较细胞上清中抗原的表达情况，选择转染效率较高的huh7肝癌细胞和表达HBV抗原较丰富的HBV1.3倍体1021进行研究，同时发现在转染细胞上清中能直接检测到HBcAg，然后通过HBsAg/HBcAg交叉捕获实验和蔗糖密度梯度超离分析推断1021转染细胞上清中分泌了完整的病毒颗粒，其性质与血清中Dane颗粒类似，但也有一些问题如病毒颗粒包膜不充分，暴露了部分Core。然后采用基因重组技术将HBV基因组中的复制调控元件和Luciferase基因进行不同方式的重组，构建成三种携带Luciferase报告基因的HBV假病毒载体HBV-A、HBV-B和HBV-C。经DNA测序和转染细胞检测Luciferase的表达，鉴定假病毒载体构建成功。通过蔗糖密度梯度超离和PCR的方法分析比较三种假病毒载体与1021共转染的细胞上清，结果显示假病毒载体HBV-A与1021共转染上清中能同时检测到HBV DNA和Luciferase报告基因，说明产生了包裹Luciferase报告基因的假病毒。分别用共转染细胞上清直接感染和超离纯化的假病毒感染huh7细胞，4天后检测细胞中Luciferase的表达，结果在直接感染的细胞中能检测到一定的Luciferase反应，说明生产的假病毒颗粒能够感染细胞且达到了能够检测的水平。　　 总之，本课题成功构建了含Luciferase报告基因和HBV复制调控元件的假病毒载体HBV-A，体外实验证明假病毒载体与1021共转染后细胞上清中同时有包裹HBV DNA和Luciferase报告基因的病毒颗粒，说明产生的病毒可用于细胞感染实验，且Luciferase可以作为假病毒是否感染的报告基因。