血清/血浆中miR-21与食管癌关系的病例对照研究

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背景与目的:食管癌是世界上最常见的八大恶性肿瘤之一,我国食管癌发病率和死亡率位居世界之冠。食管癌就诊时多处于中晚期,相当部分的病人已不能手术治疗,总的五年生存率很低,但是早期食管癌手术10年生存率可达95.00%。因此提高食管癌早期诊断率以便进行二级预防,十分必要。目前较常用的诊断方法是食管功能检查、影像学检查、食管脱落细胞学检查和食管镜检查,但会给患者造成较大的伤害和痛苦,且敏感性较差。在过去对miRNA的研究中,发现miRNA能够成为肿瘤的一种新的补充生物标志物,而目前研究较多的血清/血浆miRNA则可能给肿瘤诊断提供了一个新的选择。miR-21作为一个重要的miRNA,在多种肿瘤细胞中异常表达,参与了细胞的分化、增殖和凋亡,与肿瘤发生发展密切相关,对于肿瘤的诊断、治疗和预后,具有重要的临床意义。然而,就目前文献报道来看,没有发现血清/血浆中miR-21与食管癌相关性的研究,本论文旨在揭示食管癌患者血清/血浆中miR-21的表达情况,评估血清/血浆中miR-21表达水平作为一个新的食管癌生物标志物的价值。方法:血液标本由汕头大学医学院附属第一医院检验科收集,冰盒送运,-80℃超低温冰箱保存。Trizol法提取22例食管鳞癌患者的血清/血浆及22例正常体检者血清/血浆总RNA,以及5例手术患者术前术后的血清/血浆总RNA,运用紫外分光光度仪和凝胶成像系统对所提总RNA的纯度和完整性进行分析。设计miR-21和内参照U6的茎环结构反转录引物和PCR扩增引物,利用SYBR Green实时荧光定量PCR法检测miR-21及内参照U6的表达水平。运用spss17.0对所得数据进行分析。结果: SYBR Green实时荧光定量PCR检测得到的U6和miR-21熔解曲线单一,PCR产物特异。22例正常体检者组血清/血浆miR-21的表达水平是食管鳞癌患者的1.70倍,但是两者差异无统计学意义(P>0.05)。5例手术患者术后血清/血浆miR-21的表达水平是术前的4.56倍(P<0.05)。食管癌血清/血浆miR-21的表达水平与性别、年龄、癌发部位、分化程度、分期、转移类型、有无放化疗无相关性(P>0.05),但与有无手术、是否转移相关(P<0.05)。结论:食管癌患者血清/血浆中的miR-21表达水平低于正常体检者,但差别无统计学意义;食管癌患者血清/血浆miR-21的表达水平与有无手术、是否转移相关;血清/血浆中的miRNA具有较高的稳定性,检验剩余血能够很好的用于血清/血浆中miRNAs表达水平研究;检测患者血清/血浆miR-21的表达水平有可能为食管癌的诊断提供一个新的分子生物学指标,但后期仍需扩大样本量进行分析。
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