镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ基因的克隆及表达

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:laopoxqq
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
蜱是一种重要的体表寄生虫,是许多人和动物疾病的传播媒介,经蜱传播的病原体有病毒、立克次体、螺旋体以及原虫。为了寻找新的抗蜱免疫候选抗原,我们从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库筛选目的EST序列,通过RACE方法获取该EST全长序列。用RT-PCR分析该基因在蜱体内的分布,并研究该基因是否含内含子。将该基因连接到pET-32a(+)表达载体,并转入宿主菌SL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Westernblot分析。结果从该文库的EST中筛选得到了一个含polyA尾的肌钙蛋白Ⅰ(TnⅠ)基因疑似序列,经5-RACE方法得到了该基因的全长序列。基因全长852bp,编码219个氨基酸,预测分子量约为25kDa。经同源性比较,该基因预测的氨基酸序列与长角血蜱肌钙蛋白Ⅰ(GenBank,GI:14041807)有很高的同源性(同源性为84.47%),肌动蛋白结合位点位于147-167氨基酸处,且与长角血蜱肌钙蛋白Ⅰ肌动蛋白结合位点完全相同,表明该基因是镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ基因。RT-PCR分析表明,该基因在镰形扇头蜱卵、幼蜱、若蜱、成蜱以及壳、唾液腺、肠均有表达。以镰形扇头蜱基因组DNA为模板扩增到编码肌钙蛋白Ⅰ的基因组序列,测序分析,该序列不含内含子。TnⅠ基因可以在BL21中高效表达,融合蛋白分子量大小为45kDa。Westernblot分析表明,抗TnⅠ重组蛋白兔血清可以识别蜱体内的TnⅠ,并在22kDa和36kDa之间有两条带,说明在蜱体内可能同时存在两个大小不等的TnⅠ。综上所述,本研究首次克隆、表达了镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ基因,并对其功能进行了初步研究,为该基因的进一步研究打下了基础。
其他文献
四月,春草如在显影剂里刚刚露出一点轮廓,还没形成势力,梨花已经开放。梨花以花瓣试探天气,摊开瓷器似的白花瓣。而红花在六月之后才露头,红在炎热里不容易凋谢。梨花为山川
期刊
禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属甲型流感病毒。它是一种有囊膜、单股负链、分节段的RNA病毒。根据AIV对禽鸟的致病性,AIV分为低致病性AIV和高致
(一)rn淡青色的天幕下,细雨正悠悠地下着,淅沥的雨水像一串串跳动的音符,与植物嬉戏间发出欢快的笑声.氤氲的空气中酝酿出一抹静谧的淡绿色,渲染着忙碌的校园生活.虽是细雨,
期刊
学生在接触系统的学校学习之前,通过生活观察和体验已经形成了一些概念、经验或思维方式.这些非正式概念、经验或思维方式在正式学习时会同新知识混淆、冲突.我们把这类起负
随着新时期发展,在高中生物教学课堂,教师应该重视引入环境教育内容,科学的进行教学实践研究,从而帮助学生提高环保意识,以更好地为社会发展奠定基础.本文阐述了高中环境教育
第十二名:摩羯座(中招指数:30%)rn就算是全员动员的大制作,比如大家统一口径告诉摩羯座朋友他马上就要当选班长了,他最多只会信三分.结果,你必须要赶在他去感谢老师任命之前,
期刊
为了查明在新疆自然条件下,土壤水份和光照强度对大豆干物质生产和生态的影响,进行了4种灌溉量和4种光照率处理的裂区试验,在开花期处理1个月.试验期间使用了计算机控制下的
“笑纳”并非笑着纳rn中国自古就号称礼仪之邦,中国人说话做事讲究一个“礼”字.随着时代的发展,我们逐渐远离了繁文缛节,一些文明礼貌用语也渐渐在我们的生活中隐去,我们偶
期刊
喝水呛到rn[文艺一点的说法]冰水在喉头激起涟漪.rn[文艺到闹心的说法]冰水偏偏在喉头萦绕,激起一阵寒咳的涟漪.rn[文艺到闹心且骗稿费的说法]然而,冰水偏偏在我那不发出一点
期刊
一天,Q博士加班到很晚,于是乘出租车回家.路上,司机问Q博士:“你会开车么?”Q博士回答:“不会,正准备考驾照呢!”司机说:“你还是别考了,现在马路杀手太多了,别看他们平时在
期刊