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目的：研究两种冷冻保护剂乙烯已二醇(Ethylene Glycol,EG)和甘油(Clycero,GC)在不同浓度和暴露时间的条件下对桑葚胚及囊胚的毒性影响；比较桑葚胚、早期囊胚和囊胚经玻璃化法(Vitrification)、EG慢速冷冻和GC慢速冷冻三种方法冻融后胚胎继续发育的潜能；初步确定玻璃化法冷冻种植前晚发育时期胚胎的最佳阶段。 方法：1．桑葚胚、早期囊胚和囊胚分别暴露于1.5M EG磷酸盐缓冲液、1.5M GC磷酸盐缓冲液20min，6.0M EG磷酸盐缓冲液5min，以暴露于不含冷冻保护剂的磷酸盐缓冲液为对照，观察在胚胎体外培养系统M16培养液继续发育的情况。2．桑葚胚、早期囊胚和囊胚三个发育阶段的胚胎均用玻璃化法、EG慢速冷冻和GC慢速冷冻法冻存，比较三种方法冻融后胚胎继续发育的情况。3．比较三个阶段胚胎经玻璃化法冻存后冻融胚胎继续发育的情况。 结果：1在1.5M EG磷酸盐缓冲液、1.5M GC磷酸盐缓冲液中暴露20min，6.0M EG磷酸盐缓冲液暴露5min后，在体外培养中桑葚胚、早期囊胚和囊胚继续发育与对照组相比没有显著性差异，对胚胎没有明显毒性影响。2桑葚胚经玻璃化法、EG慢速冷冻法和GC慢速冷冻法三种方法冻存后，冻融胚胎囊胚形成率分别为：85.7％、71.1％、48.7％，囊胚孵出率分别为：59.5％、42.2％、23.1％，玻璃化法和EG慢速冷冻法高于GC慢速冷冻法(P＜0.01，P＜O.05)，玻璃化法与EG慢速冷冻法相比没有显著性差异(P＞0.05)。三种方法冻存早天津医科大学硕士学位论文期襄胚融解后扩张襄胚形成率分别为65.钱、26.既、41%，班胚孵出率51.钱、l外、28.既，冻存班胚融解后囊胚重新扩张率为43.既、21 .1%、22.5%，.胚孵出率为29.2%、10.5%、1既。在早期襄胚和澳胚的冻存中，玻璃化法冻融后胚胎继续发育率高于EG慢速冷冻法和GC慢速冷冻法(P<0 .01，P<0 .05)EG慢速冷冻法与Gc慢速冷冻法相比没有显著性差异(P>0 .05)。结论:1.SMEG、1.SMGC溶液及6.0施G在本研究采用的冷冻条件下对胚胎没有毒性影响。对干桑甚胚，玻璃化法和EG慢速冷冻法优于GC慢速冷冻法;早期囊胚和囊胚玻璃化法冷冻效果优于EG和Gc慢速冷冻法。在慢速冷冻中，EG较GC更适于桑套胚。桑甚胚可能是玻璃化法冻存种植前晚发育时期胚胎的最佳阶段。