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结核病是一个古老的、在全球广泛流行的传染病,至今仍然是威胁人民健康的重要公共卫生问题,而且可能是一个阻碍社会和经济发展的社会问题。自1882年Koch氏发现结核分支杆菌以来,全球己有2亿人死于结核病,现在全球约20亿的人口受到结核菌感染,结核病例有2000万。乙胺丁醇(EMB)作为一种重要的抗结核化疗药物,对增殖期的结核分支杆菌有选择性抑菌作用,自从应用于抗结核治疗以来,疗效一直较为满意。但从二十世纪八十年代中期开始,由于结核分支杆菌自身的适应性改变、不正规的治疗、移民和爱滋病的流行等原因结核分支杆菌对抗结核药物的耐药情况变得严重起来。EMB耐药情况虽然不如异烟肼(INH)、利福平(RFP)和链霉素(SM)那么严重,但近来亦有不断升高的趋势。近年来,不少临床和科研人员一直致力于EMB耐药机制的研究,但到目前为止对EMB的作用机制和耐药机制仍然没有完全清楚。本研究通过对EMB耐药结核分枝杆菌embB基因片段的分析,了解我国新疆部分地区结核分支杆菌EMB耐药和embB基因突变的关系,并进一步探索快速检测结核分支杆菌EMB耐药性的实验方法。目的:本文阐述了分支杆菌耐乙胺丁醇(EMB)的分子机制,了解了结核杆菌耐EMB分离株embB基因突变情况;探索了聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术检测结核杆菌耐乙胺丁醇的应用价值,建立了快速、有效的结核分枝杆菌药物敏感性试验方法。方法:临床标本进行传统分支杆菌培养、菌种鉴定和药敏试验;通过PCR-SSCP和PCR- RFLP技术分析结核分支杆菌临床分离株embB基因。结果:对98株结核分支杆菌进行了传统药物敏感性试验,52株为EMB敏感株,46株为耐EMB菌株。从Genbank下载结核分支杆菌embB基因序列,应用引物设计软件Premier5.0设计一对引物XH1和XH2扩增embB基因的400bpDNA片段。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv做对照,98株结核分支杆菌临床分离株embB基因400bp扩增片段经限制性内切酶HaeⅢ酶切后,结果显示:52株EMB敏感株和39株耐EMB菌株的PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)图谱与结核分支杆菌标准株相同,余7株耐EMB菌株RFLP图谱与结核分支杆菌标准株有明显差异。通过PCR-SSCP方法分析98株结核分支杆菌分离株embB 400bp片段,发现52株EMB敏感株SSCP图谱与结核分支杆菌标准菌株相同;46株耐EMB菌株中,28株(60.9%)SSCP图谱与结核分支杆菌标准株不同,余18株SSCP图谱与结核分支杆菌标准株相同。结论:对引物XH1和XH2扩增的400bp片段,采用8%(29:1)非变性聚丙烯酞胺凝胶在150V稳压下电泳7小时效果较理想。embB基因突变,尤其306位密码子突变是结核分支杆菌耐乙胺丁醇的主要分子机制。PCR-SSCP可快速检测出部分结核分支杆菌耐EMB临床分离株,但比DNA测序简便、快速,便于临床推广应用。