四川省若尔盖县牦牛和高原鼢鼠及其体外寄生虫携带虫媒病原的检测及遗传进化分析

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若尔盖县地处青藏高原东北边缘,位于四川、青海和甘肃三省的交汇区。当地生态资源丰富,草地面积占幅员面积的76.1%。畜牧业是当地的支柱产业之一,牦牛、藏绵羊、河曲马等家畜的存栏量居四川省前列,野生动物和啮齿类动物在当地广泛存在。本实验室前期在若尔盖县部分地区开展寄生虫调查时发现当地存在多种媒介生物,其中包括蜱、跳蚤和羊蜱蝇。这些媒介生物是多种病原(病毒、细菌、立克次体等)的重要传播媒介或储存宿主,可传播或携带包括人兽共患病病原在内的多种病原,严重威胁畜禽养殖效益和人类生命健康。近年来,由于人与媒介生物及野生动物之间的接触导致的人兽共患病事件时有发生,国内外研究人员对虫媒病的关注日益增加。若尔盖县地处高原藏区,样本采集难度大,相关研究资料匮乏,因此在当地开展媒介生物及相关虫媒病的研究在兽医学和公共卫生学方面具有积极的意义。目的:本研究旨在掌握若尔盖县媒介生物的分布资料及其携带虫媒病的情况,为若尔盖县媒介生物的防治和虫媒病的防控提供数据支持。方法:采集若尔盖县牦牛体表寄生蜱、高原鼢鼠体表跳蚤和藏绵羊体表羊蜱蝇,对虫体进行形态学鉴定。无菌采集高原鼢鼠脾脏和牦牛全血。使用试剂盒提取样本基因组DNA,对虫体样本进行分子鉴定,通过PCR方法分别对无形体的16S r RNA基因、巴尔通体的glt A和rpo B基因、立克次体的Omp A和Omp B基因、沃尔巴克体16S r RNA基因、鼠疫耶尔森菌Omp F基因和伯氏疏螺旋体fla B基因进行扩增。将PCR阳性产物送至生工生物工程(成都)有限公司进行测序,对所得序列进行拼接和比对,构建系统发育树。最后,使用SPSS软件对不同媒介生物和动物样本中虫媒病原的阳性率进行分析。结果:1.从若尔盖县8个乡镇32个牧场采集到牦牛体表寄生蜱1957只,共鉴定出3属3种。其中森林革蜱1099只,占56.2%,为本此调查的优势蜱种;微小扇头蜱453只,占23.1%;长角血蜱405只,占20.7%。2.从若尔盖县4个乡镇12个牧场的藏绵羊体表采集到439只疑似羊蜱蝇的昆虫,经鉴定均为羊蜱蝇成虫。3.在若尔盖县2个乡镇60只高原鼢鼠体表采集到跳蚤318匹,共鉴定出2属3种。其中副规新蚤193匹,占60.7%,为本次调查的优势蚤种。鞍新蚤125匹,占39.3%。多刺狭蚤10匹,占3.1%。4.高原鼢鼠寄生蚤的巴尔通体阳性率为49.4%,斑点热群立克次体阳性率为11.6%。未检出无形体、鼠疫耶尔森菌和伯氏疏螺旋体。5.蜱的无形体阳性率为27.7%,巴尔通体阳性率为11.9%,斑点热群立克次体的阳性率为41.7%,沃尔巴克体的阳性率为93.9%。未检出鼠疫耶尔森菌和伯氏疏螺旋体。6.羊蜱蝇的无形体阳性率为9.8%,巴尔通体阳性率为100.0%,沃尔巴克体的阳性率为98.6%。未检出斑点热群立克次体、鼠疫耶尔森菌和伯氏疏螺旋体。7.高原鼢鼠巴尔通体的阳性率为83.3%,斑点热群立克次体阳性率为20.0%。未检出无形体、鼠疫耶尔森菌和伯氏疏螺旋体。8.牦牛无形体的阳性率为53.1%,斑点热群立克次体的阳性率为3.1%。未检出巴尔通体、斑点热群立克次体、鼠疫耶尔森菌和伯氏疏螺旋体。9.序列分析及进化分析结果显示,本研究检出了Anaplasma ovis、A.bovis、A.phagocytophilum、A.capra和A.marginal 5种无形体,Bartonella melophagi、B.grahamii和Bartonella sp.3种巴尔通体,Rickettsia raoultii、Candidatus R.longicornii和R.massiliae 3种立克次体和2个超群的沃尔巴克体。结论:1.若尔盖县至少存在森林革蜱、长角血蜱和微小扇头蜱,森林革蜱为本研究中的优势种。2.若尔盖县高原鼢鼠体表寄生蚤种至少存在副规新蚤、鞍新蚤和多刺狭蚤,在本研究中副规新蚤为优势种。3.若尔盖县存在羊蜱蝇。4.在本研究的这些样本中携带的病原体至少存在A.ovis、A.bovis、A.marginal、A.phagocytophilum、A.capra、B.melophagi、B.grahamii、Bartonella sp.、R.raoultii、Candidatus R.longicornii和R.massiliae。
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