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肝癌是我国高发病率的恶性肿瘤之一,占所有恶性肿瘤发病率的第三位,其死亡率占所有恶性肿瘤相关死亡的第二位。我国乙肝人群庞大,多数患者未能早期发现,一旦发现多数已属中晚期。虽以手术治疗为主的综合性治疗已显著改善治疗效果,但对未能进行手术切除肿瘤的患者,目前仍缺乏有效的治疗手段。近年来,以各种方式干预肝癌的增殖和转移成为肝癌的研究方向和热点。肝癌的发生和基因的表达改变相关,其异常的增殖和转移也受到基因表达的调控。锌指蛋白217(zinc finger protein 217)是锌指蛋白家族的一员,锌指结构被证实能有效参与基因的转录调控环节。近年来的研究发现,锌指蛋白217在乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、胃癌中均存在较正常组织表达上调的现象,并且可以通过上皮间质转化促进乳腺癌细胞的侵袭和转移,提示锌指蛋白217可能与肝癌的发生发展亦存在密切关系。第一部分锌指蛋白217(zinc finger protein 217)在肝细胞肝癌中表达上调并能促进细胞增殖、抑制凋亡目的:ZNF217在乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、胃癌中存在较正常组织表达上调的现象。本文旨在证实ZNF217在肝癌中表达上调并促进细胞增殖、抑制凋亡。方法:运用免疫组化分析22对肝癌与癌旁正常肝组织ZNF217蛋白表达水平。对肝癌细胞株 Hep-G2、Huh-7、SK-HEP-1、PLC/PRF/5 和正常肝细胞株 L-02 进行 ZNF217 mRNA和蛋白水平的检测。运用小干扰RNA建立敲低ZNF217模型,运用腺病毒载体外源性加入重组ZNF217,建立过表达ZNF217的细胞模型。应用CCK-8实验、EdU实验评估处理前后细胞增殖活性。运用流式细胞术分析ZNF217对细胞凋亡、周期的影响,运用Western blot方法检测周期相关蛋白、凋亡相关蛋白的表达差异,并探讨其诱导潜在的机制。结果:22对临床组织样本免疫组化显示,与癌旁正常肝组织相比,16例(73%)患者癌组织中ZNF217表达上调,4例(18%)患者无明显差异,2例患者(9%)癌旁组织中ZNF217表达较高。Hep-G2、Huh-7、SK-HEP-1、PLC/PRF/5四种肝癌细胞株较正常肝细胞株L-02在mRNA和蛋白水平均存在明显ZNF217表达上调。小干扰处理组较对照组在CCK-8实验、EdU实验中细胞增值活性降低(p=0.0052),细胞G1期阻滞增加,cyclinDl及CDK-4表达上升,cyclinB1表达下降,细胞凋亡比例增加,Bax及活化的caspase-3表达升高;腺病毒载体处理组较对照组在CCK-8实验、EdU实验中细胞增值活性升高(p=0.0007),细胞G1期阻滞减少,cyclinD1及CDK-4表达降低,cyclinB1表达升高,细胞凋亡比例减少,Bax及活化的caspase-3表达降低。结论:ZNF217在肝细胞肝癌中表达上调,通过解除细胞G1期阻滞促进细胞增殖,可能通过下调caspase-3信号通路抑制凋亡。第二部分锌指蛋白217(zinc finger protein 217)通过上皮间质转化(EMT)促进肝癌细胞迁移目的:ZNF217具有显著提高细胞增殖并解除细胞G1期阻滞的作用。在乳腺癌中,ZNF217参与上皮间质转化EMT过程实现细胞迁移、侵袭及远处转移能力的增强。本研究探讨ZNF217在肝癌细胞中通过上皮间质转化过程增强肝癌细胞迁移潜能。方法:运用小干扰RNA建立敲低ZNF217模型,运用腺病毒载体外源性加入重组ZNF217,建立过表达ZNF217的细胞模型。应用wound-healing实验、transwell实验评估处理前后细胞迁移能力。运用Western blot方法检测上皮间质转化过程的中上皮及间质标记蛋白,并探讨其潜在的机制。结果:ZNF217敲低实验中,wound-healing实验结果提示,小干扰处理后18h,实验组遗留划痕未愈合宽度较对照组明显较宽(p<0.0001);transwell实验结果提示,实验组穿透细胞比例较对照组明显减少(p<0.0001);ZNF217过表达实验中,wound-healing实验结果提示,腺病毒载体处理后24h,实验组遗留划痕未愈合宽度较对照组明显缩窄(p<0.0001);transwell实验结果提示,实验组穿透细胞比例较对照组明显增加(p<0.0001)。结论:本研究表明,ZNF217在肝细胞肝癌中可以促进细胞迁移,并且上皮间质转化可能成为该过程的重要机制。