目的：　　肾细胞癌(Renal Cell Carcinoma，RCC)是一种起源于肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤，新近研究报道，在欧美地区恶性肿瘤发病率中，RCC在男性中发病率排第六，女性中为第十，RCC已成为威胁人类健康的又一高风险性的恶性肿瘤。初期RCC通常无明显症状，且RCC常以转移快，复发性高为特征，约25％的患者在确诊时已发生远处转移。晚期RCC对于放疗、化疗等临床普遍的治疗手段表现出抵抗效应，因此，探讨其有关生物学特征及其发生机制，寻找有效的药物对于RCC治疗，降低患者死亡率尤为重要。　　小白菊内酯(Parthenolide，PTL)为天然存在的倍半萜内酯，从草本植物小白菊胚芽中纯化而来，可用于治疗发热、痉挛、眩晕等，另外还具有止痛及抗炎等作用。近年来，PTL已被证明具有调节免疫，抗氧化、抗肿瘤，尤其是杀伤肿瘤干细胞的作用。目前，PTL对肿瘤的抑制作用已在乳腺癌，肺癌和胰腺癌等肿瘤中得到证实。有证据表明，PTL的这些生物学特性归因于其对NF-kB信号通路的抑制，因此，PTL被认为是NF-kB信号通路的天然抑制剂。同时，另有研究表明NF-kB信号通路可与多种信号通路发生相互作用，包括PI3K-Akt信号通路等，PI3K-Akt信号通路与肿瘤细胞的发生发展密切相关，可调控肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、上皮-间质转化等多种生物学特征。　　上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT)作为哺乳动物胚胎发育的重要生理过程，也对促进恶性肿瘤发生发展起到重要作用。在EMT过程中，原本呈现上皮样表型的细胞失去其细胞极性，表现出间充质样表型细胞的特点，细胞间黏附力减弱，能够在细胞基质自由移动，同时伴有上皮标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和间质标志物N-钙粘蛋白(N-cadherin)以及波形蛋白(Vimentin)表达水平的显著变化。另外，EMT过程还涉及多种信号通路和转录因子的参与，其中之一是Snail，作为E-cadherin的阻遏物可触发EMT过程，通过与E-cadherin启动子区域的E-box盒结合，下调E-cadherin表达，诱导EMT发生。近年来研究证实PI3K-Akt信号通路在肿瘤细胞的EMT过程中起重要作用，PI3K-Akt信号通路关键分子Akt可调节Snail表达从而调节肿瘤细胞的EMT过程。同时也有报道称Snail是GSK-3β的下游靶标，GSK-3β可调节Snail的核定位影响肿瘤细胞的EMT过程。研究证实，发生EMT的乳腺癌细胞除获得抗凋亡和侵袭能力外，还产生了自我更新能力，表现出干细胞特点，这也为探究肿瘤发生发展的机制及治疗提供新的方向。　　越来越多的研究表明识别肿瘤的生物学特征及其发生机制，开发针对性的治疗手段是治疗肿瘤的重要步骤。据报道，PTL可通过抑制NF-kB信号通路抑制肿瘤细胞的增殖、迁移与侵袭、促进凋亡，此外，PTL还可通过PI3K-Akt信号通路调节宫颈癌细胞的凋亡和自噬，PI3K-Akt又可调节EMT的驱动因子Snail，且PI3K-Akt信号通路又可与NF-kB信号通路发生相互作用，因此，PI3K-Akt信号通路可能是PTL的潜在作用通路并极大可能影响肿瘤的EMT过程。当前，PTL是否能够抑制肿瘤细胞的EMT过程以及肿瘤细胞干性的相关研究少见，尤其在RCC中。因此，本研究以人RCC细胞系（786-O和ACHN）为对象，探讨PTL对人RCC细胞EMT过程的影响，同时，验证并探讨PTL对人RCC细胞增殖、RCC细胞干性等生物学特征的影响，并进一步探讨PTL影响人RCC细胞EMT过程可能的作用机制。　　方法：　　CCK-8法检测PTL对RCC细胞（786-O和ACHN）生存活力的影响，同时根据IC50值设置实验分组：对照组（PTL未处理组）、低浓度实验组(4μm/L PTL处理组)、高浓度实验组(8μm/L PTL处理组)。应用划痕实验及Transwell小室实验检测PTL对两种RCC细胞迁移、侵袭能力的影响，并在蛋白水平上通过Western Blot实验观察基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达变化。应用TUNEL法检测PTL对两种RCC细胞凋亡的影响，并在蛋白水平上通过Western Blot实验观察凋亡相关蛋白BAX、Bcl2及Caspase3的表达变化。应用免疫荧光实验检测PTL对两种RCC细胞EMT过程的抑制作用，同样，通过Western Blot实验检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及EMT驱动因子Snail的表达变化，并在基因水平通过实时荧光定量PCR对个别指标mRNA表达情况进一步验证。应用干细胞微成球实验检测PTL对两种RCC细胞干性的影响，也在蛋白水平通过Western Blot实验观察干性标志物ALDH1、CD133、Sox2及Oct4的表达变化，最终，我们探讨PTL对RCC上皮-间质转化的可能作用机制，通过Western Blot实验观察PI3K-Akt信号通路关键分子PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt的表达变化。　　结果：　　PTL处理两种RCC细胞，一定时间后，CCK-8实验结果显示，PTL可抑制RCC细胞增殖，且随着药物浓度增加，抑制效率增加。集落形成实验直观上验证显示，实验组较对照组集落形成数量减少，说明PTL可剂量依赖性抑制RCC细胞增殖。划痕实验结果显示，划痕愈合比例实验组较对照组明显减少，同时Transwell小室实验中，实验组细胞穿膜数量较对照组减少，Western Blot实验检测到转移相关蛋白基质金属蛋白酶MMP2、MMP9实验组较对照组表达水平降低，说明PTL可剂量依赖性抑制RCC细胞迁移与侵袭。TUNEL实验显示，实验组较对照组，荧光亮染细胞增多，即被标记的DNA断裂的细胞多，DAPI染色后，细胞核具有变形现象，Western Blot实验检测凋亡相关蛋白，实验组较对照组BAX、Cleaved caspase3表达水平升高，Bcl2表达水平降低，说明PTL可促进RCC细胞凋亡。免疫荧光实验显示，实验组较对照组EMT相关蛋白E-cadherin表达水平升高，可见荧光亮染点增加，N-cadherin、Vimentin及转录因子Snail表达水平表达降低，可见荧光亮染点减少，Western Blot实验中，发现实验组较对照组，EMT相关蛋白E-cadherin表达水平升高，N-cadherin、波形蛋白Vimentin及转录因子Snail表达水平表达降低。实时荧光定量PCR结果显示实验组较对照组，E-cadherin的mRNA表达水平升高，Snail的mRNA表达水平降低，说明PTL可抑制RCC细胞EMT过程。干细胞微成球实验结果显示，实验组较对照组干细胞成球能力弱，球体状态差，高浓度组抑制更明显，细胞膜呈破裂溶解趋势。Western Blot实验同时检测到干性相关标志物：ALDH1、Sox2、Oct4及RCC特异性干性标志物CD133实验组较对照组均低表达，说明PTL可抑制RCC细胞干性。此外，研究中Western Blot实验观察到PI3-Akt信号通路关键分子PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt实验组与对照组相比表达水平均降低。　　结论：　　1.PTL可抑制RCC细胞增殖。　　2.PTL可抑制RCC细胞迁移、侵袭。　　3.PTL可促进RCC细胞凋亡。　　4.PTL可抑制RCC细胞EMT过程。　　5.PTL可抑制RCC细胞干性。　　6.PTL可能通过PI3K-Akt信号通路抑制RCC细胞的EMT过程。