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本研究以蝴蝶兰(Phalaenopsis hybrid)和萼脊兰(Sedirea japonica (Linden et Rchb. f.) Garay et Sweet)为材料,分别建立了蝴蝶兰和萼脊兰的再生系统,优化了两种兰花的遗传转化条件。克隆了蝴蝶兰和萼脊兰的ACC氧化酶的基因片段,构建了ACC氧化酶反义基因的植物表达载体。采用根癌农杆菌介导法,将ACC氧化酶反义基因导入蝴蝶兰和萼脊兰植株内,并对蝴蝶兰和萼脊兰的转化植株进行了GUS组织化学染色检验和筛选,还对蝴蝶兰的转化植株进行了PCR和Southern杂交分子检验。主要研究结果如下:1.蝴蝶兰再生系统的条件优化。分别以蝴蝶兰的胚、花梗节间切片和叶片为材料,通过对不同培养基、不同激素及组合、不同添加物等影响因子的试验,优化了蝴蝶兰植株再生系统建立的条件。结果表明,蝴蝶兰胚非共生萌发适宜的培养基为:1/3MS+ KT 0.5mg/L + CW15.0% + AC 2.0g/L+蔗糖20.0g/L +琼脂8.0g/L;花梗节间切片诱导类原球茎体(PLBs)和无菌苗叶片诱导原球茎的适宜培养基为:Hyponex1 2.5g/L + Hyponex2 0.5g/L+TDZ 1.0mg/L +2,4-D 1.0mg/L +蔗糖30.0g/L + CW 10% + AC 2.0 g/L。丛生芽增殖培养基以改良Kyoto培养基为宜:Hyponex 1 2.5g/L + Hyponex2 0.5g/L + 6-BA 5.0mg/L +蔗糖30.0g/L + CW 10% + AC 2.0 g/L;生根培养基:Hyponex1 3.0g/L + NAA 0.5 mg/L + AC 2.0 g/L +蔗糖20.0g/L +琼脂8.0g/L。2.以萼脊兰的胚为材料,通过非共生萌发,获得了萼脊兰的原球茎。适合胚萌发的培养基:1/4MS + KT 0.5mg/L + CW 10% +蔗糖20.0g/L +琼脂7.0g/L。原球茎增殖的培养基为1/3MS+ NAA 0.1 mg/L +6-BA 5.0 mg/L+ CW 10% +蔗糖20.0g/L +琼脂7.0g/L。分化培养基:1/3MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.01mg/L+椰子水10%+蛋白胨2.0g/L +活性炭2.0 g/L +蔗糖20g/L +琼脂7.0g/L。分化和生根培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L +IBA 0.5mg/L+蔗糖20.0g/L +AC 2.0g/L +蛋白胨2.0 g/L+琼脂7.0g/L。3.根据已报道的兰科植物ACO基因序列,通过RT-PCR和PCR,分别从蝴蝶兰和萼脊兰授粉后的花朵中克隆了ACC氧化酶(ACO)的基因片段,测序后以反向插入到植物表达载体pBI121的CaMV 35S启动子和GUS基因之间,构建了ACO反义基因的植物表达载体pBI-antiACO。4.优化了蝴蝶兰和萼脊兰遗传转化条件。优化的条件为:预培养3d,添加2,4-D等生长素,菌液浓度OD600≈0.4的1.5,AS100μmol/L。5.以蝴蝶兰和萼脊兰的原球茎为受体材料,通过根癌农杆菌介导法,对两种兰花进行了ACO反义基因的遗传转化。6.采用GUS组织化学染色法对两种兰花的转化植株进行了检验和筛选,并用PCR和Southern杂交方法对蝴蝶兰的转化植株进行了分子检验,得到了两种兰花的ACO反义基因的转化植株。本项研究采用根癌农杆菌介导法,在国内外首次将ACC氧化酶反义基因导入蝴蝶兰和萼脊兰植株内,并对蝴蝶兰和萼脊兰的转化植株进行了GUS组织化学染色检验和筛选,还对蝴蝶兰的转化植株进行了PCR和Southern杂交分子检验,得到了转化植物。尤其是萼脊兰组培快繁和植株再生、ACC氧化酶片段的获得和遗传转化系统的建立等,尚未见有报道。本研究内容为蝴蝶兰和萼脊兰的分子育种和转基因研究提供了技术平台,也为培育兰花新品种、延长蝴蝶兰和萼脊兰的花朵观赏期开辟了新途径。