论文部分内容阅读
目的:探讨感染人胰岛素基因的人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)促进组织工程化脂肪形成的可行性。方法:1.取P4hUCMSCs,以1×105/m1种于4个6孔板,待长到80%融合时,以MOI=20感染2个6孔板,观测绿色荧光蛋白表达情况。实验分为4组:对照组(C组)为P4hUCMSCs;实验组1(E1组)为携带人胰岛素基因腺病毒转染的P4hUCMSCs;实验组2(E2组)为P4hUCMSCs+成脂诱导液;实验组3(E3组)为携带人胰岛素基因腺病毒转染的P4hUCMSCs+成脂诱导液。72hr后用成脂诱导培养基定向诱导分化实验组,油红O染色观察诱导情况。2.体内移植实验Wistar雌鼠24只,每组12只;一组在背部皮下移植接种有携带人胰岛素基因腺病毒载体转染的hUCMSCs的蚕丝蛋白支架(实验组);一组在背部皮下移植接种有hUCMSCs的蚕丝蛋白支架(对照组)。分别于8.12周后,取材行冰冻切片,观察荧光,行油红O染色,HE染色及扫描电镜,观察存活情况。结果:1.感染48h后E1组和E3组的hUCMSCs在荧光显微镜下显现弱荧光,72h后荧光较强。经脂肪诱导培养液培养14d后,E1组、E2组、E3组油红O染色后显微镜下呈红色,C组未见脂滴形成,E1组可见一些细小脂滴形成;E3组与E2组相比,脂滴大且多,定量分析显示,E3组油红O染色阳性的面积和吸光度大于E2组(P<0.05);2.实验组与对照组移植物油红O染色均呈阳性,实验组脂肪样细胞明显多于对照组,有显著统计学差异(P<0.05)。结论:1.感染携带人胰岛素基因腺病毒颗粒能促进未诱导的hUCMSCs向脂肪细胞分化;2.感染携带人胰岛素基因腺病毒颗粒的hUCMSCs与蚕丝蛋白支架有很好的相容性,并能更好的促进工程化脂肪的形成。