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研究目的:为了更好地了解PD的病因、发病机制、发生发展过程中的分子机制及潜在的治疗靶点,本实验分别构建了模拟突变型LRRK2遗传因素、突变型VPS35-α-synuclein遗传因素相互作用及突变型VPS35-LRRK2遗传因素相互作用导致的PD果蝇模型,并进行了用于构建PD小鼠模型的相关病毒载体的筛选,以便构建模拟PD相关遗传因素导致的PD小鼠模型,进行后续研究。方法:1.利用Elav-GAL4,Ddc-GAL4,Chat-GAL4,24B-GAL4果蝇品系,将UAS-LRRK2-WT,UAS-LRRK2-G2019S和UAS-LRRK2-R1441C表达在所有神经元,多巴胺能神经元,胆碱能神经元和肌肉组织中,构建模拟突变型LRRK2遗传因素导致的PD果蝇模型。2.将VPS35基因构建到pUAST表达载体中,利用显微注射技术将构建好的重组分子注射入w1118果蝇卵,并利用mini-white标记基因筛选,得到UAS-VPS35-WT,UAS-VPS35-D260N转基因果蝇品系。3.利用Elav-GAL4,Ddc-GAL4果蝇品系,将UAS-VPS35-WT,UAS-VPS35-D260N,UAS-VPS35-RNAi表达在所有神经元和多巴胺能神经元中,将所获得的Elav-GAL4;UAS-VPS35-WT(D260N/RNAi),Ddc-GAL4;UAS-VPS35-WT(D260N/RNAi)果蝇品系分别与UAS-α-synuclein-A53T,UAS-LRRK2-G2019S果蝇品系杂交,构建模拟突变型VPS35-α-synuclein遗传因素相互作用及突变型VPS35-LRRK2遗传因素相互作用导致的PD果蝇模型。4.观察果蝇的生命周期和运动能力的变化情况,应用免疫荧光化学法和Western blot检测TH的表达变化。5.通过脑立体定位技术,向C57B小鼠分别注射6种病毒载体,以用于构建PD小鼠模型的相关病毒载体的筛选。结果:1.Elav-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S,Elav-GAL4;UAS-LRRK2-R1441C,Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S,Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-R1441C突变果蝇品系均出现生命周期缩短、运动能力(攀爬能力)减弱和多巴胺能神经元的丢失。Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S果蝇品系较之更为突出的表现出这些症状。2.VPS35(D260N/RNAi)-α-synuclein(A53T),VPS35(D260N/RNAi)-LRRK2(G2019S)突变果蝇品系均出现生命周期缩短、运动能力(攀爬能力)减弱和多巴胺能神经元的丢失。3.rAAV1-EGFP病毒载体在术后3 w C57B小鼠的纹状体中表达少,黑质中无表达,术后4 w和5 w C57B小鼠的纹状体和黑质中均有表达;HSV1/NX01-GFP病毒载体在术后3 w、4 w和5 w C57B小鼠的纹状体和黑质中均有表达;HSV1/NX03-GFP病毒载体在术后3 w C57B小鼠的纹状体和黑质中无表达,在术后4 w和5 w C57B小鼠的纹状体和黑质中表达少且零星分布。结论:1.Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S突变果蝇品系可以作为转基因PD果蝇模型用于后续的研究。2.VPS35(D260N/RNAi)-α-synuclein(A53T),VPS35(D260N/RNAi)-LRRK2(G2019S)突变果蝇品系可以作为转基因PD果蝇模型用于后续的研究。3.HSV1/NX01-GFP病毒载体可以用于构建转基因PD小鼠模型,用于后续的研究。