目的:采用乳液聚合法制备聚乙烯基萘(PVN)纳米微球及其羧基化PVN纳米微球(PVN-COOH),将其用作β2微球蛋白(β2-M)胶乳增强免疫比浊(LETIA)检测试剂的新型载体。制备多孔硅胶涂层毛细管柱,应用于微柱细胞膜色谱(mCMC)。方法:以乙烯基萘(VN)为聚合单体,十二烷基硫酸钠(SDS)为乳化剂,过硫酸钾(KPS)为引发剂,碳酸盐缓冲液(C-buffer)为分散相,采用乳液聚合法制备了PVN纳米微球。通过VN与丙烯酸钠共聚反应,制备了PVN-COOH纳米微球,考察SDS、VN、KPS、丙烯酸钠的加入量、分散相的pH值对两种纳米微球粒径及PVN-COOH微球羧基密度的影响。将所制备的微球分别利用扫描电子显微镜、红外光谱、粒径分析等仪器和方法进行结构及形貌的表征。以物理吸附方式将β2-M的抗体固定到PVN及自制聚苯乙烯(PS)微球表面;羧化的PVN、PS微球表面的羧基经N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠(Sulfo-NHS)与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸(EDC)活化后,将β2-M抗体偶联到微球上,制备得到β2-M-LETIA检测试剂。自制试剂利用紫外-可见分光光度计、生化分析仪等仪器对试剂的性能进行评价,并与聚苯乙烯微球检测试剂比对,对所得结果进行数据统计学处理并分析计算结果。微柱细胞膜色谱(mCMC)柱制备主要包括以下三步,第一步,毛细管柱的预处理,第二步,制备多孔硅胶涂层毛细管柱:以聚乙二醇(PEG)、尿素为制孔剂,正硅酸甲酯(TMOS)为单体,冰醋酸为溶剂,毛细管柱为载体,通过水热反应、酸活化、干燥过程,制备出多孔硅胶涂层毛细管柱。最后一步为细胞膜的固定化(本论文中采用兔红细胞为模型)。将所制备的毛细管柱分别利用高效毛细管电泳仪、扫描电子显微镜、荧光倒置显微镜进行表征。并采用维拉帕米为阳性药物,通过前沿分析实验确定不同制备条件所制备微柱的动态吸附容量。统筹分析上述结果,最终确定mCMC的最优制备条件。结果:本实验使用乳液聚合法成功制备了不同粒径的纳米级PVN、PVN-COOH微球,通过优化制备条件,可实现对微球粒径的调控。采用扫描电子显微镜观测到,制备的微球具有良好的球形度且粒径分布均匀;红外光谱证明制备的羧基化微球上含有羧基基团。考查出β2-M抗体偶联到PVN、PVN-COOH微球上的最佳条件。在上述基础上研制了以PVN及其PVN-COOH微球为载体的β2-M-LETIA检测试剂。通过与PS微球为载体的试剂进行比较,证明本论文研制的载体微球在灵敏度、线性范围等方面具有显著优势。采用水热合成法,制备了多孔硅胶涂层毛细管柱,通过改变管柱制备配方,可实现涂层厚度、孔径、孔径分布的调控。通过对细胞膜的荧光标记,实现了mCMC固定相的可视化,通过荧光强度的分析有效的反应了不同制备条件获得的mCMC管柱中细胞膜的载量。维拉帕米的前沿分析结果表明,涂层后的管柱的动态吸附容量较未涂层的管柱显著提高,且不同配方制备的涂层管柱的动态吸附容量存在显著差异。综合对比荧光强度与维拉帕米的前沿分析数据,获得了最优的mCMC管柱制备条件。结论:利用本文采用的方法和条件可以成功制备粒径大小可控、单分散的PVN、PVN-COOH微球,开发了在纳米微球表面偶联抗体的方法,自制β2-M-LETIA检测试剂。对制备条件进行了考察和优化,得到最佳反应条件。PVN、PVN-COOH纳米微球作为LETIA检测试剂的载体具有很好应用前景。在mCMC方面,与无涂层的毛细管相比,多孔硅胶涂层的毛细管柱可显著提高细胞膜载量,提高阳性药物的动态吸附容量。故多孔硅胶涂层毛细管柱更适用于mCMC。