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细胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）是细胞自然分泌的无复制能力的具双分子磷脂层的颗粒物,具有细胞间通讯功能,在疾病诊断、预后和治疗中具有重要意义。本课题组前期建立了一种二分式尺寸排阻层析法（size-exclusion chromatography,SEC）法,可实现FBS中EVs的快速分离。本研究利用人血清为样本,对常用于EVs分离的SEC柱填料Sepharose CL系列进行了比较,并对10 m L和20 m L柱床条件下的柱分离效果进行了检测。我们评估并确认20 m L CL-6B SEC分离柱达到了本研究的最佳条件,蛋白质与EVs分离度（resolution,Rs）为1.83。在20m L+CL-6B柱床参数条件下,1 m L人血清样品中可分离获取EVs颗粒数（1.32±0.5）×1012个,EVs组织分的颗粒/蛋白比率达到（1.2±0.9）×10~9 particles/μg protein,其所制备EVs纯度优于q EV试剂盒。免疫印迹分析结果亦显示,本方法分离得到EVs组分中含EVs标记物Integrin、Sytenin,且白蛋白、HDL等杂质可被有效去除。纳米颗粒示踪分析（Nanoparticle tracking analysis,NTA）结果显示本方法分离所得EVs颗粒大小基本介于50-200 nm之间,电镜下亦显示出30-200 nm杯装结构。作为应用示例,我们利用二分式SEC法对结直肠癌患者血浆中EVs和蛋白质组分进行了分离,发现miR-21更多地富集于蛋白质组分、而不是EVs组分中。HBV miR-3是首个在血浆EVs中发现的由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）编码的micro RNA。我们的前期研究表明,在慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者外周血EVs中,HBV miR-3的含量或可补充pg RNA用于评价乙肝病毒储存库转录活跃程度。作为另一个应用示例,本研究构建了HBV miR-3过表达的Huh-7细胞模型,并用二分式SEC法分离其培养上清中的EVs和蛋白质组分。我们发现HBV miR-3在胞外亦更多地富集于蛋白质组分、而不是EVs组分。综上,本研究建立了一种适用于临床的人血清EVs分离的二分式SEC方法,相比常规SEC方法,其可简便的获得高纯度EVs。利用该SEC,本研究还发现,以往被认作EVs内容物的miR-21和HBV miR-3,更多地存在蛋白质组分而非EVs中。