论文部分内容阅读
背景乳腺癌属于全球高发癌症,在我国也是女性发病率最高的癌症,且近年来发病年龄愈趋向于年轻化,肿瘤本身呈高度异质性,病死率高。三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)是其中一种乳腺癌亚型,该类型特点是癌细胞表面雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(Her-2)免疫组化结果显示均为阴性,故而缺少特异性靶点,可行治疗手段单一,死亡率高,对该类癌细胞进展的分子机制研究有助于为三阴性乳腺癌治疗提供新靶点。程序性死亡配体1(PD-L1),又有B7-H1的称法,能和程序性死亡受体1(PD-1)互相识别并结合,在T细胞免疫反应过程中发挥负性调节作用。既往有研究表明各类型乳腺癌中三阴性乳腺癌细胞组织表面PD-L1表达较高,为研究PD-l1对三阴性乳腺癌细胞发生、发展的影响,本研究选取具有人三阴性乳腺癌特征的MDA-MB-231细胞株作为研究对象,探讨沉默PD-L1基因后三阴性乳腺癌细胞增殖及凋亡的情况。目的初步验证PD-L1在人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞株的表达情况;应用RNA干扰技术下调MDA-MB-231细胞系中PD-L1的表达,观察沉默PD-L1后对细胞增殖及凋亡的影响。方法1、Real-time PCR法检测三组乳腺细胞MDA-MB-231(ER、PR、Her-2均阴性)、MCF-7(ER、PR+;Her-2-)以及HBL-100(正常乳腺上皮细胞)中PD-L1的表达情况;2、应用RNA干扰技术构建稳定表达PD-L1 shRNA的MDA-MB-231细胞;3、转染后Real-time PCR检测PD-L1 mRNA;4、CCK-8法检测三组细胞增殖情况;流式细胞仪检测三组细胞凋亡及细胞周期。结果1、与正常乳腺上皮细胞(HBL-100)相比,PD-L1在乳腺癌中高表达(P<0.01);且在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达高于MCF-7(P<0.01);2、Real-time PCR检测转染后,相比较于空白组和对照组,PD-L1 sh RNA处理组中PD-L1 mRNA表达下降;3、转染PD-L1 shRNA后,MDA-MB-231细胞增殖能力(0.34±0.02)较阴性对照组(0.67±0.04)明显下降(F=120.342,P<0.01);流式细胞仪结果显示PD-L1下调后实验组凋亡率(15.2%)较对照组明显升高(3.4%);G0/G1期的细胞比例(69.72±1.0)%较阴性对照组(58.34±1.8)%增加(F=58.071,P<0.01)。结论PD-L1在人乳腺癌细胞中表达增高,尤其在三阴性乳腺癌细胞中表达明显;抑制细胞株MDA-MB-231 PD-L1的表达后,比之于空白组和对照组,三阴性乳腺癌细胞增值能力明显受到抑制,凋亡率增加,处于G0/G1期的细胞增多。