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产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类能引起人类潜在致命性疾病的食物源病原。患者可出现腹泻,出血性肠炎和溶血性尿毒症(Haemolytic uraemic syndrome,HUS)。STEC感染已成为严重的公共卫生问题,它涉及大暴发流行和HUS,是造成儿童严重肾衰竭的主要原因。许多血清型的STEC与人类疾病有关,已报道的STEC感染中,大多数暴发流行和散发病例都涉及STEC的一种特殊类型—肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage Escherichia coli,EHEC)0157:H7,非0157STEC感染的病例也在增加。反刍动物,特别是牛,是STEC的主要贮主。典型的感染主要通过摄食污染的食物或水、与动物的直接接触或经由人-人传播造成。牛作为STEC最大的储库,对人类的健康和食品安全构成威胁。鉴于EHEC对人类的高致病性,对其在牛群中的流行病学、致病性和致病机理等方面的研究显得很有必要。1江苏某地区部分牛场产志贺毒素大肠杆菌的分离鉴定通过对江苏某地区共6个(肉、奶)牛场,分4、5、6、11月份,进行定群跟踪调查,初步了解STEC在牛群中的带菌和流行情况。基于本实验室已经建立的多重PCR方法对stx1、stx2、eaeA、ehxA四个基因进行检测,对检测出的阳性样品,0157STEC通过CT-SMAC平板无色菌落的方法分离,非O157STEC采用挑选CT-SMAC平板上红色菌落的方法进行分离。总体上,肉牛stx基因阳性率为9.8%(25/256)低于奶牛阳性率(20.2%,214/1059)；肉牛分离率为0.4%(1/256)低于奶牛分离率(4.7%,50/1059)。相同月份不同牛场的stx基因阳性率和STEC分离率差异明显；同一牛场的初筛率秋季(11月份52.9%,83/157)高于春、夏季(4月11%,11/100,和6月16.9%,43/254)。本次共分离到12个O血清型STEC,16个OH血清型,其中O26、O49、O55、O65、O68、O74、O109、O136、O153、0157等血清型据报道曾引起人类肠道疾病的暴发,有2种血清型(O26:H11,O157:H7)与人类HUS患者体内分离的血清型相符。该地区的优势血清型为0109和074,其中074：H29血清型STEC在多个肉奶牛场都分离到。本文使用STEC灌服感染BALB/c小鼠的模型,小鼠于攻毒后2-5d出现病变、死亡。从受试菌株对小鼠致死情况来看,分离到的部分牛源0157和非0157STEC菌株,具有一定的致病性。受试菌株对小鼠致死率呈现一定的血清型相关,即0157致死率最高,026次之,0109最低。2牛源STEC分离株的遗传相关性分析对A奶牛场30株0109：H6血清型,Stx2+毒力基因型STEC,进行Xbal酶切后脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分析,受试分离株虽然从不同的牛体分离到,但获得了完全相同的酶切带型。F值为1,显然它们属于同一克隆群。有力支持了0109：H6血清型在该场占优势。对13株不同来源的STEC分离株进行Xbal-PFGE,产生了13种不同的酶切图谱。总体来看,不同来源的STEC Dice相似系数在49%～73%之间,说明这些菌株具有不同的遗传发生背景及进化路线,也反映该地区牛源STEC克隆群丰富,潜在致人感染的机会可能更多。所以对牛源分离株间遗传相关性的分析可为从源头上保证食品安全,追踪感染来源提供帮助,对防止STEC的传播和扩散具有重要意义。