【摘 要】
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目的:（1）探讨miR302/367簇在前列腺癌及雄激素非依赖性产生中的作用。（2）探讨Numb在前列腺癌中的功能和分子机制以及Numb-/low细胞群在雄激素非依赖性中的作用。方法:（1）通过Taqman实时荧光定量PCR的方法检测29例人前列腺癌组织和22例正常组织、10例Pten敲除小鼠前列腺癌组织及7例正常小鼠前列腺组织以及前列腺癌细胞系中的表达情况。通过在前列腺癌细胞系中过表达和敲低mi
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目的:（1）探讨miR302/367簇在前列腺癌及雄激素非依赖性产生中的作用。（2）探讨Numb在前列腺癌中的功能和分子机制以及Numb-/low细胞群在雄激素非依赖性中的作用。方法:（1）通过Taqman实时荧光定量PCR的方法检测29例人前列腺癌组织和22例正常组织、10例Pten敲除小鼠前列腺癌组织及7例正常小鼠前列腺组织以及前列腺癌细胞系中的表达情况。通过在前列腺癌细胞系中过表达和敲低miR-302/367簇并开展一系列体内体外实验探讨miR-302/367簇在前列腺癌中的生物学功能。此外,通过一系列生物化学方法探究miR-302/367簇的下游信号调节因子。（2）分析多个Oncomine数据库及人和小鼠前列腺癌组织和正常组织中Numb基因的表达水平;在前列腺肿瘤细胞系中过表达或敲低Numb基因并开展体内体外实验探讨其生物学功能。此外,本研究建立Numb启动子慢病毒报告系统,把前列腺肿瘤细胞分为Numb-/low和Numbhigh两群并分析这两群细胞对雄激素剥夺疗法的敏感性。利用Luciferase报告系统实验、免疫印迹实验和实时定量PCR分析Numb下游可能的调控因子。结果:（1）miR-302/367簇在前列腺癌组织中的表达量显著高于癌旁正常组织;在雄激素非依赖性前列腺癌细胞系中的表达水平显著高于雄激素敏感性前列腺癌细胞系。过表达miR-302/367簇显著促进前列腺癌细胞的成球能力、增殖能力、迁移能力、抗雄激素剥夺能力和致瘤性;另一方面,敲低miR-302/367簇显著抑制前列腺癌细胞的成瘤率。机制研究方面,我们发现,在前列腺肿瘤中,肿瘤抑制性Hippo信号通路的一个关键分子LATS2是miR-302/367簇的直接作用靶点。miR-302/367簇通过下调LATS2激酶的m RNA和蛋白水平,引起p-YAP蛋白水平降低从而促进YAP癌蛋白入核增加。在过表达miR-302/367簇的前列腺癌细胞系中恢复LATS2的表达可以削弱miR-302/367簇的促肿瘤作用。（2）Numb在前列腺肿瘤中的表达下调且与其恶性程度成负相关。功能上,Numb通过抑制Notch和Hedgehog通路活性而抑制前列腺肿瘤细胞异种移植瘤生长和雄激素非依赖性的产生。利用Numb启动子慢病毒报告系统将前列腺肿瘤细胞分为Numbhigh和Numb-/low两群。相比Numbhigh细胞,Numb-/low前列腺肿瘤细胞是一群形态较小且处于静息期的细胞,优先表达Notch和Hedgehog通路下游相关基因和干性相关基因且具有较强的抗雄激素剥夺能力。雄激素剥夺条件下抑制Notch和Hedgehog信号通路显著增加Numb-/low细胞的凋亡比例。结论:（1）miR-302/367/LATS2/YAP信号通路在调控前列腺肿瘤增殖细胞中的作用至关重要并促进雄激素非依赖性前列腺癌的产生。（2）Numb-/low代表一群雄激素非依赖性前列腺肿瘤细胞并具有较高的Notch和Hedgehog信号通路活性。
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