双向氢化酶基因的克隆、分析及其在节旋藻和螺旋藻分子系统学中的应用

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sandy323199000
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
根据GenBank中报道的蓝藻双向氢化酶基因序列设计引物,用PCR和染色体步移法得到了节旋藻双向氢化酶的基因全序列。包括心肌黄酶部分(由hoxEFU编码)和[NiFe]氢化酶部分(由hoxYH编码)共5个亚基及上游349bp的序列。其中在基因内部发现了一个推测的开放阅读框。双向氢化酶操纵子全序列长度为7081bp,其中包括hoxE基因上游349bp,hoxE 540 bp,hoxF 1596bp,hoxF和hoxU基因间ORF 1650bp,hoxU 732bp,hoxY 549bp,hoxH 1431 bp以及各基因之间的间隔区。分别对这些亚基进行了核酸序列、氨基酸分析,及二级结构和三维结构的预测。 在得到双向氢化酶基因群中发现两段具有启动子功能的序列,分别位于hoxE基因的上游,hoxF和hoxU基因的间隔区。将推测的启动子序列和启动子探测载体pEGFP-1进行重组,用热激转化法和自然转化法分别对大肠杆菌JM109和集胞藻Synechococcus sp PCC6803进行转化,并在两种受体细胞中均检测到了绿色荧光蛋白的表达,证明所得到的序列具有启动子功能。 通过Southern杂交证明在节旋藻FACHB341基因组中hoxH是单拷贝基因,通过RT-PCR方法验证了hoxH和hoxY在节旋藻FACHB341中的表达,节旋藻FACHB341中hoxH和hoxY是在非固氮蓝藻中典型的[NiFe]氢化酶基因。将完整的节旋藻FACHB341[NiFe]氢化酶基因克隆出来,与表达载体PBV220重组,转化大肠杆菌。在42℃热诱导4小时大小亚基的表达量分别达到12.1%和21.0%,即使稀释10倍也能看到明显的表达产物。 在节旋藻和螺旋藻分子系统学研究中,克隆了节旋藻和螺旋藻的[NiFe]氢化酶大小亚基基因hoxH和hoxY,并进行序列测定和分子系统学分析,结果发现,所克隆hoxH的长度为在节旋藻中为1349 bp,GC含量为45.7%~47.3%,在螺旋藻中长度为1343 bp,GC含量为50.4%~50.9%。hoxH基因在节旋藻各品系间的相似性高达95.7%~99.8%,比节旋藻和螺旋藻两个属间的相似性双向氢化酶基因的克隆、分析及其在节旋藻和螺旋藻分子系统学中的应用(72.9一77.0%)高。但螺旋藻属的两个品系间相似性仅为72.5%低于属间的相似性。基于hoxH基因用MEGAZ软件中的邻接法构建了系统发生树,发现5株节旋藻聚类在一起,bootstraP支持率达到100%。螺旋藻SP.s351与节旋藻构成单系群,而SP.440与鱼腥藻和念珠藻聚类,bootstrap值为100,与其他节旋藻属5个品系和螺旋藻1个品系在在进化上处于不同的分枝。 从节旋藻属5个品系和螺旋藻属1个品系中克隆了 hoxy基因的部分序列。序列长度都是479bP,在节旋藻中该基因核酸序列GC含量为46.0%到46.6%,螺旋藻中是43.5%。节旋藻各品系间序列的相似性介于93.7%到100%,明显高于节旋藻属和螺旋藻属间的序列相似性69.5一72.2%。两个属中HoxY氨基酸序列的比较也表明螺旋藻和节旋藻之间存在较大差异,尽管它们有相同的保守区域。通过比较相应的核昔酸序列构建了系统树,表明螺旋藻和节旋藻属处于不同的进化分枝。
其他文献
研究背景艾滋病作为一种高致死性的慢性传染病,已经成为全球重大公共卫生问题之一。异性性传播是我国目前HIV传播的主要途径,包括非婚异性性传播与单阳家庭婚内性传播,其中以
日前,贵州省卫健委、民政厅等14部门联合发文,支持养老机构内部设立医疗机构,对养老机构内部设置诊所、卫生所(室)、医务室、护理站,取消行政审批,实行备案管理。据了解,该省
重力活塞取样器贯入深度研究对于取样效率的提高和仪器安全有着重要影响, 根据取样海底沉积物类型及工程参数对取样器可贯入深度进行预判是研究的重点.基于重力活塞取样器结
20世纪七八十年代以后,世界经济发展的虚拟化趋向凸显,世界主要发达资本主义国家的经济结构逐渐呈现“倒金字塔式”,实体经济同虚拟经济的发展严重失衡,而其背后的直接动因同
目的探讨白藜芦醇(Res)对脑组织缺血再灌注损伤的影响,以及其对炎症因子表达水平的影响。方法选取健康成年SPF级SD大鼠30只,体重200~220 g,按随机数表法分为三组:假手术组(Sh
随着计算机技术的迅速发展,社会进入信息化和大数据的时代。为了保障社会的稳定和人们的生活便利,数据安全、数据共享、数据防篡改等问题一直是人们研究的重点。传统中心化的
从20世纪末至今,随着信息技术的快速革新和现代科学的快速发展,服务贸易发展越来越迅速,已经成为世界经济发展的新引擎。服务贸易作为不发生所有权转移的无形商品所进行的国