番茄JERFs基因的核定位特性及其对下游基因的表达调控作用

来源 :中国农业科学院生物技术研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xin24
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植物在生长过程中,会遇到各种各样的生物胁迫和非生物胁迫。当病原菌侵染植物时,通过乙烯、水杨酸等信号途径能够诱导体内大量防御相关基因的表达。而转录因子对基因的转录调控起着至关重要的作用。 本实验室运用酵母单杂交的方法,以番茄为材料,从番茄的cDNA表达文库中分离了一系列能够编码转录因子的基因,它们都可对乙烯和茉莉素产生应答,所以命名为JERFs。该转录因子属于ERF型家族,含有60个左右氨基酸残基组成的非常保守的DNA结合区,在酵母体内能够激活含有GCC-box顺式作用元件的相关基因的表达,并受乙烯、水杨酸、茉莉素、高盐的诱导表达。 本实验进一步验证JERFs的细胞核定位的特性,将JERFs基因置于含有CaMV35S强启动子的植物表达载体pROK2上,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,利用农杆菌介导的遗传转化方法将表达载体导入洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下观察GFP的定位分布,瞬时表达实验结果表明GFP与JERFs基因融合后,只在细胞核中表达,说明JERFs基因能够通过核定位信号区进入核内调控基因的表达。 为了进一步了解JERFs基因在植物体内的调控作用,本实验通过农杆菌渗透的方法将JERF3转入烟草并获得了烟草超表达转基因植株,以阳性植株为材料,分析一些启动子中含有GCC-box顺式作用元件的相关基因如Osmotin(渗调蛋白)、Prb-1b(碱性Pr1)、GLA(葡聚糖酶)、CHN50(几丁质酶),在未经胁迫处理下的表达特性,实验结果表明JERF3在植物体内能够调控一些PR基因的表达,而在野生型烟草中不表达,从而说明JERF3可能作为转录激活子调控含GCC-box的基因表达。 通过本实验进一步证明了JERFs基因是ERF家族中的新成员,而且JERFs能够调控一些PR基因的表达,而许多PR基因的表达与生物胁迫和非生物胁迫都息息相关,因此我们还需要对JERFs的功能做进一步的分析,是否JERFs能在多种信号途径中发挥作用是我们后期的工作重点。
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