日本血吸虫病是危害严重的人兽共患寄生虫病.其寄生的哺乳动物繁多,但无论野生的东方田鼠还是室内繁殖的东方田鼠均对日本血吸虫具有天然抗性,且这种抗性可稳定遗传。东方田鼠的这种特性,为抗日本血吸虫病的研究提供了新的思路。在前期研究中,我们构建了东方田鼠骨髓cDNA文库,应用表达克隆法将文库cDNA与瞬时表达载体pcDNA1.1构建成重组质粒,转染HEK293 T细胞,筛选出一个对日本血吸虫童虫具有较高杀伤率的次级亚基因池gE76,并从次级亚基因池gE76中筛选到对血吸虫具有抗性的候选基因gE76.44。生物信息学分析表明,E76.44是KPNA2的同源基因,属于importinα基因家族。为了进一步确认Mf-KPNA2的抗日本血吸虫活性,本研究应用逆转录病毒载体pLXSN,建立pLXSN-KPNA2重组逆转录病毒载体系统,pLXSN-KPNA2重组病毒载体通过磷酸钙转染法导入PA317细胞后,包装出pLXSN-KPNA2重组病毒,释放到培养基中,收集这些培养基,运用超速离心的方法进行浓缩,测定病毒滴度。本实验成功构建了pLXSN-KPNA2重组病毒载体,连同空载体pLXSN分别转染PA317细胞,通过鉴定得到阳性克隆,收集到足够的病毒,并进行了浓缩和滴度测定,可用于下一步的动物实验。