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硒被世界卫生组织列为人和动物必需的14种微量元素之一,能够能有效清除生物体内的自由基、增强机体抗氧化能力和免疫功能、降低患癌风险。亚硒酸钠(SS)是目前应用最广泛的硒强化剂。富硒酵母(SEY)是在培养酵母的过程中加入硒元素,酵母生长时吸收利用硒,使硒与酵母体内的蛋白质和多糖有机结合转化为生物硒,再经过生物工程技术的处理而研制成一种有机生物制剂。它在提供硒的同时,还可以提高一定数量的蛋白质、氨基酸、维生素等营养物质。L-硒甲基硒代半胱氨酸(SeMSC)是硒代半胱氨酸的甲基化衍生物,与其它有机硒如富硒酵母相比,具有化学结构明确,含量稳定、生物利用率高、抗癌活性强等优点。VE和紫萝卜提取物都具有安全性高、无副作用等优点,不仅能减缓心血管炎症,还能辅助治疗许多疾病如抗动脉硬化、保护肝脏、抗炎症反应和抗癌等。许多研究发现,多种抗氧化功效因子联合使用比单一组分有更好的抗氧化效果,这种“1+1>2”的协同效应激起了人们极大的兴趣。协同作用可以有效地节约资源,极大地提高抗氧化能力。因此,不同形态硒、VE和紫萝卜提取物的抗氧化协同作用值得深入探索。本课题拟从体外化学抗氧化作用、细胞内抗氧化作用和动物体内抗氧化作用三个方面分别对不同形态硒、维生素E、紫萝卜提取物单独和联用的抗氧化作用进行研究。主要内容如下:(1)应用PH示差法测定了紫萝卜提取物中花色苷的含量,纯度大概为10.42%。再应用高效液相三重四级杆飞行时间串联质谱法(HPLC-QTOF-MS)初步鉴定出紫萝卜提取物花色苷的组分结构,主要有矢车菊色素-3-咖啡酰阿拉伯糖苷,天竺葵色素-3-槐糖苷-5-葡萄糖苷,天竺葵色素-3-葡糖苷,矢车菊素-3-(阿魏酰)槐糖苷-5-葡萄糖苷,天竺葵色素-3-(6,咖啡酰槐糖苷)-5-葡萄糖苷,天竺葵色素-3,5-双葡萄糖苷,矢车菊色素-3-葡萄糖苷,天竺葵色素-3-对香豆酰槐糖苷-5-葡萄糖苷等8种花色苷。(2)选择三种体外化学抗氧化评价方法(DPPH·法、Fe3+还原法及ABTS+·法)研究不同形态的硒、维生素E、紫萝卜提取物体外化学抗氧化能力及其协同作用,运用等效面分析法对复合抗氧化剂在这三种体外抗氧化模型中联合作用效果进行研究及评价。结果显示,L-硒甲基硒代半胱氨酸和亚硒酸钠在体外的化学抗氧化能力不强,这可能是由于亚硒酸钠(SS)和L-硒甲基硒代半胱氨酸(SeMSC)主要是通过供给硒元素的形式在生物体内作为多种抗氧化酶的活性中心,通过这些抗氧化酶催化氧化还原反应来发挥抗氧化作用,减轻机体内活性氧自由基给生物体带来的氧化损伤。富硒酵母在体外化学抗氧化能力测定中效果很好,并且与维生素E和紫萝卜提取物之间存在着抗氧化协同作用。(3)将H9c2细胞随机分为11组,经不同样品组干预处理后,通过H202诱导细胞氧化损伤,检测各组H9c2细胞的存活率,脂质氧化终产物丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。进而比较各处理组对H9c2心肌细胞的保护作用。实验结果表明不同形态硒(L-硒甲基硒代半胱氨酸、亚硒酸钠、富硒酵母)、维生素E、紫萝卜提取物单独和联合使用都能提高损伤细胞的存活率,降低MDA含量,提高抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)的活力,L-硒甲基硒代半胱氨酸的效果弱于其他另外两种硒,联合用药组增强细胞抗氧化能力的水平明显高于单独用药组。(4)对实验大鼠连续腹腔注射D-半乳糖6周,建立大鼠氧化衰老模型。按照分组给实验大鼠灌胃对应的药物。测定各组大鼠血清、心脏、肝脏、肾脏中脂质过氧化物(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、蛋白羰基(PCO)的含量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力,比较各处理组抗氧化能力的强弱。实验结果表明不同形态硒(L-硒甲基硒代半胱氨酸、亚硒酸钠、富硒酵母)、维生素E、紫萝卜提取物单独和联合使用都能提高机体的抗氧化能力,降低MDA和PCO含量,提高GSH的含量,提高抗氧化酶(SOD、GSH-Px)和T-AOC的活力,并且有机硒(SeMSC、SEY)的抗氧化功能要强于无机硒,联合用药组增强机体抗氧化能力的水平明显高于单独用药组。