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溶酶体在细胞各种生命活动,包括物质代谢、细胞膜循环、细胞凋亡中发挥着重要作用,如果它发生功能紊乱,会造成诸如肿瘤、炎症、矽肺等多种疾病的产生。实现对溶酶体的标记,直观地检测物质在溶酶体的定位改变,不仅能够帮助理解溶酶体参与生命活动的分子机制,而且对疾病的治疗具有重要的指导意义。 本课题利用基于活性组织蛋白酶家族的透膜小分子探针(CpFABPs),结合活性组织蛋白酶家族位于溶酶体的特点,发展CpFABPs成为一种新型的溶酶体标记探针。 以LysoTracker荧光探针为标准物,经过共定位分析,课题证实CpFABPs在不同的细胞系都能实现对溶酶体的标记,而且即使转变CpFABPs的荧光基团,这种标记也几乎不受影响。在细胞裂解液和活细胞水平,通过直接标记或抑制剂的竞争性标记分析,本文确认CpFABPs标记溶酶体的机制在于其对活性组织蛋白酶家族的特异性标记作用。CpFABPs共价结合组织蛋白酶的作用不易被破坏,因此其被成功地应用于固定细胞、透化细胞和氯化铵处理细胞的溶酶体标记。CpFABPs能够在活细胞水平指示组织蛋白酶的位置变化,因此实现了对依赖溶酶体的细胞凋亡途径的检测。 综上所述,CpFABPs不仅能够作为溶酶体的标记物,也可以对依赖溶酶体的细胞凋亡进行检测,为溶酶体相关的研究提供了有力工具。