论文部分内容阅读
目的：在细胞水平和小鼠体内,研究n-3多不饱和脂肪酸对人乳腺癌细胞的影响,并探讨相关机制。方法：(1)在有或无葡萄糖条件下,用二十二碳六烯酸(DHA)处理人乳腺癌细胞MDA-MB-231,利用流式细胞仪检测细胞的死亡率,并通过倒置显微镜观察细胞形态的变化。(2)用H2DCFDA探针流式细胞术测定DHA和N-乙酰-半胱氨酸(NAC)单独处理或共处理后细胞内活性氧(ROS)的水平。(3)用Western blotting法检测药物处理后细胞内cleaved Caspase-3的量。(4)用MTT法检测DHA及他莫西芬单用或联用对乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用。(5)通过构建fat-1转基因严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠来研究内源性n-3多不饱和脂肪酸对人乳腺癌细胞的影响,小鼠体内脂肪酸的含量通过气相色谱(GC)来检测。结果：(1)在无葡萄糖条件下,DHA以浓度依赖的方式促进乳腺癌细胞MDA-MB-231死亡,在这个过程中,DHA促使细胞内ROS的水平显著升高(P<0.005),然而当DHA和NAC共处理细胞时,细胞死亡率和细胞内ROS的水平均显著降低,另外,当培养基中含有葡萄糖(5mM)时,DHA在同样处理条件下不能促进细胞的死亡。(2)Western blotting检测结果表明DHA可以引起cleaved Caspase-3的表达增多,同时这种变化可以被NAC抑制。(3)MTT实验结果表明DHA和他莫西芬都可以抑制肿瘤细胞的增殖,并且它们之间有协同作用。(4)通过GC分析,我们发现SCID-fat-1小鼠体内的n-3多不饱和脂肪酸的含量明显高于SCID小鼠,同时SCID-fat-1小鼠体内多不饱和脂肪酸n-6／n-3的比值明显小于SCID小鼠。(5)MDA-MB-231细胞无法在SCID-fat-1、鼠上成瘤,而可以在SCID小鼠上成瘤。结论：(1)在无葡萄糖条件下,DHA可以促进MDA-MB-231细胞死亡。(2)DHA通过增加细胞内ROS,继而激活Caspase-3凋亡通路来促进无葡萄糖条件下MDA-MB-231细胞死亡。(3)DHA和他莫西芬均可抑制MDA-MB-231细胞活力,并且二者具有协同作用。(4)内源性n-3多不饱和脂肪酸的增加完全抑制了MDA-MB-231细胞在SCID-fat-1鼠上成瘤。