【摘 要】
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该工作构建了山羊β-酪蛋白基因启动子指导的高效表达突变体hFIX的乳腺特异表达载体,将该载体转染小鼠乳腺上皮细胞HC-¨并制备转基因小鼠,在细胞及个体水平上验证其凝血活性
【出 处】
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上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学
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该工作构建了山羊β-酪蛋白基因启动子指导的高效表达突变体hFIX的乳腺特异表达载体,将该载体转染小鼠乳腺上皮细胞HC-¨并制备转基因小鼠,在细胞及个体水平上验证其凝血活性是否比野生型有显著提高;同时采用PCR、RT-PCR、定量PCR、Western blot、荧光原位杂交(FISH)、组织切片分析等一系列方法对外源基因在转基因小鼠中的整合及表达情况作了详细的分析,为今后通过制备转基因大动物来生产hFIX等药用蛋白提供了科学的资料.该工作主要分四部分:一、表达载体的构建二、细胞水平的研究.三、转基因小鼠的制备和检测为.四、外源基因在转基因小鼠中整合及表达情况的分析综上所述,该工作在细胞水平和个体水平上研究了突变体hFIX的表达情况.结果表明:(1)hFIX蛋白当其第338位氨基酸由精氨酸突变为丙氨酸后其凝血活性有较大程度的提高,使用含有突变体hFIX基因的乳腺特异表达载体制备的转基因小鼠可以在乳汁中特异高效地表达具有高凝血活性的hFIX;(2)外源基因的表达也不会影响到小鼠正常的生理功能;(3)提高外源蛋白的活性有助于增加转基因动物尤其是许多低表达转基因动物的使用价值.以上的实验结果为今后利用转基因动物乳腺生物反应器生产hFIX等珍贵药用蛋白提供了科学的资料.
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