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目的用Islet-1慢病毒表达载体转染C3H10T1/2细胞,使其高表达Islet-1,特异性诱导C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞,通过检测诱导后各组细胞钠钾钙离子通道编码基因以及细胞膜离子通道电流的表达情况,分析明确Islet-1可诱导C3H10T1/2分化为具有电生理功能的心肌样细胞。方法复苏并传代培养C3H10T1/2细胞,将生长状态良好的细胞按1×104/孔接种于24孔板内,待细胞融合至70%时加入慢病毒表达载体转染C3H10T1/2细胞,荧光显微镜观察转染慢病毒后细胞绿色荧光蛋白表达以及细胞形态变化,流式细胞术检测慢病毒转染效率,并用western blot检测转染慢病毒后Islet-1表达情况；差速贴壁法分离培养新生小鼠心肌细胞,细胞免疫荧光法鉴定心肌细胞纯度；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞钠钾钙离子通道编码基因表达水平,并采用全细胞膜片钳技术检测细胞膜钠钾钙离子通道电流的表达,与空白对照组(未处理的C3H10T1/2细胞),阴性对照组(转染空慢病毒载体组),以及阳性对照组(新生小鼠心肌细胞)进行比较。结果1.转染慢病毒后96h,荧光显微镜可见细胞己表达绿色荧光蛋白；荧光表达稳定后流式检测阴性组对照组慢病毒转染效率为89%,实验组慢病毒转染效率为74.31%；观察转染慢病毒后4周,空白对照组和阴性对照组细胞排列杂乱,形态无明显差异,实验组可见多处细胞排列紧密、方向趋于一致,形态多呈梭型,立体感强,与心肌细胞相似：western blot检测实验组细胞培养4周内均可稳定高表达Islet-1。2.差速贴壁法分离培养的新生小鼠心肌细胞于24h己基本贴壁,可见单个细胞搏动,频率约为43--65次/min,72h后呈融合状态,融合的细胞可自主同步搏动,频率约为50-110次/min；免疫荧光检测约90%以上细胞可表达cTnT和CX43,可将其作为本实验的阳性对照组。3.RT-PCR结果显示实验组钠、钾、钙离子通道编码基因,即scn5a(INa离子通道编码基因)、kcnd3 (Ito离子通道编码基因)、kcnel(Iks离子通道编码基因)、kcnj2 (Ikl离子通道编码基因)、cacanlc (IL-Ca离子通道编码基因)和cacanlh (IT-Ca离子通道编码基因)表达量均明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)；4.全细胞膜片钳技术检测结果显示实验组细胞可表达钠电流(INa)、瞬时外向钾电流(Ito)、缓慢激活延迟整流钾电流(Iks)、内向整流钾电流(Ikl)以及T型钙电流(IT-Ca),其中Ito、Iks在空白对照组和阴性对照组也有表达,其余电流未在空白对照组和阴性对照组检出。实验组离子通道的峰值电流明显高于空白对照组和阴性对照组,呈现不均一性,但较心肌细胞低。结论Islet-1体外诱导C3H10T1/2细胞特异性分化为心肌细胞过程中,心肌特异钠钾钙离子通道电流的相应编码基因表达明显增加,且全细胞膜片钳技术成功检测诱导后细胞有相应钠钾钙离子通道电流的表达,证实Islet-1可特异性诱导C3H10T1/2细胞分化为具有一定生理功能的心肌细胞。