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目的:
研究RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架(chitosan/hydrogel scaffolds by animmobilized RGD peptide)对大鼠颌下腺细胞(Rat submandibular gland cellsRSGCs)粘附、增殖、分泌作用的影响。
方法:
应用体外组织块法原代培养3d龄SD大鼠的颌下腺细胞,免疫荧光法鉴定细胞来源、胰酶消化法和差速贴壁法纯化细胞、传代扩增。冻干技术制作壳聚糖水凝胶支架并以RGD肽修饰用于实验组,不含RGD肽的壳聚糖水凝胶支架用于对照组。两者支架的规格为4mmx4mmx2mm。将浓度为2.0×105个/ml的第二代大鼠颌下腺细胞悬浊液接种于RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架为实验组进行培养;将浓度为2.0×105个/ml的第二代大鼠颌下腺细胞悬浊液接种于不含RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架为对照组进行培养。
测定实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞的粘附率。MTT法检测接种后实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞增殖情况。扫描电镜观察接种的大鼠颌下腺细胞在支架上生长的超微结构。测定1d-7d培养复合物上清液中淀粉酶含量,检测实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞分泌功能。采用SPSSfor windows13.0统计分析软件对结果进行方差分析,检验水准α=0.05,P<0.05有统计学意义。
结果:
将纯化扩增的大鼠颌下腺细胞分别与RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架和不以RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架复合培养。细胞粘附率检测:实验组粘附率高于对照组,2h、24h时P>0.05;2h、4h、8h、12 h时P<0.05。细胞增殖结果显示(MTT法):接种后1d,实验组细胞数量略大于对照组(P>0.05),而3d-9d,两组支架上的细胞数量有显著性差异(P<0.05),实验组优于对照组。细胞上清液中淀粉酶含量检测:两组大鼠颌下腺细胞上清液的淀粉酶分泌量均有不同程度的增加,从3d-7d实验组优于对照组,淀粉酶含量差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电子显微镜观察:在RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架上,植入初期大鼠颌下腺细胞成圆形,散在的粘附RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架网孔内,实验组突起较少,对照组突起较少;随着时间的延长,实验组大鼠颌下腺细胞呈多角形、带有多个突起,细胞表面凹凸不平,对照组突起数量和细胞表面没有实验组明显。
结论:
以RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架对大鼠的颌下腺细胞的粘附、增殖、分泌有促进作用。