论文部分内容阅读
以克拉维酸产生菌棒状链霉菌Streptomyces clavuligerusCCRC11518(ATCC27064) III50为出发菌株，首先比较各种物理和化学诱变剂处理对其克拉维酸生物合成的影响，确定了亚硝基胍为棒状链霉菌诱变育种的诱变剂及其处理剂量：2mg/ml、40min.经浓度为2mg/ml的亚硝基胍处理40min后，采用新颖理性化筛选方法，通过逐步筛选自身代谢产物抗性突变株、克拉维酸抗性突变株和链霉素抗性突变株，最终得到一株克拉维酸高产菌VI118(效价633μg/ml)，其克拉维酸效价是出发菌株(效价377μg/ml)的167.9％.
该高产突变株在琼脂斜面培养基上连续传接10代，克拉维酸效价保持稳定.
通过单因子和多因子摇瓶正交试验，对高产菌株VI118的发酵条件进行了研究，确定最佳发酵条件：甘油60g，水解植物蛋白60g，KH2PO40.5g玉米浆7.5g，MnSO4·H200.34g，M gSO4·7H2O0.99g，FeSO4·7H2O0.56g，蒸馏1000ml，pH7.0，发酵培养基装量20ml/250ml三角瓶，接种量10％，培养温度28℃，220r/min摇床培养72h后测定效价.在最佳发酵条件下克拉维酸效价达到651μg/ml，成功把初始发酵培养基的昂贵成分替换为廉价的工业原料。
通过摇瓶分批补料试验，得到最佳补料物质和补料方式：在上述最佳发酵条件下，分别在发酵培养48h、56h、64h、72h时补加4ml无菌水，80h发酵结束，克拉维酸效价达到905μg/ml.在不增加原料成本的情况下通过摇瓶补料方式使克拉维酸效价为未补料的139.0％，总产量为未补料的264％.