目的:构建IL-15基因与AFP158-156协同表达的慢病毒载体，包装afpIL-15基因表达慢病毒，体外感染肿瘤细胞，使之能够高效地表达IL-15，达到增强免疫效应同时提供AFP158-166抗原肽的目的。　　 方法:　　 (1)构建慢病毒afpIL-15基因表达载体:首先进行质粒双酶切，将IL-2spIL-15编码序列从慢病毒质粒CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE(LT15)上撤除，然后利用PCR技术，以质粒pHi2-afpIL15-CMV-TAT(LA-15)为模板扩增IL-2afpIL-15的编码基因，将其定向克隆于质粒CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE(LT15)中，构建质粒CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE(JA15)。　　 (2)以含GFP表达质粒CS-CDF-EG-PRE(LO)为对照质粒，CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE(JA15)为表达质粒，利用脂质体介导的方法分别转染HCT116细胞、SW480细胞。　　 (3)以CS-CDF-EG-PRE(LO)为对照质粒，CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE(JA15)为表达质粒，与其他三种辅助质粒pMDL/pRRE(L7)、pRSV-Rev(L8)、pMD.G(L9)共转染293T细胞，包装含GFP、afpIL-15基因的两种慢病毒载体，感染BJAB细胞。　　 (4)利用倒置荧光显微镜观察细胞转染后绿色荧光的表达，流式细胞术(FCM)分析检测细胞的转染效率，酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞转染后24及48小时上清液中IL-15的浓度，分析IL-15基因的表达情况。　　 结果:　　 (1)质粒CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE(LT15)、pHi2-afpIL15-CMV-TAT(LA-15)、CS-CDF-EF1-afpIL15-PRE(JA15)经限制性（单、双）酶切，PCR检测及测序分析，证实afpIL-15表达质粒构建成功。　　 (2)质粒CS-CDF-EG-PRE(LO)和CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE(JA15)利用脂质体介导的方法均可转染HCT116细胞、SW480细胞，转染效率分别为10.1％及8.3％。　　 (3)以CS-CDF-EG-PRE(LO)为对照质粒，CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE(JA15)为表达质粒，与其他三种辅助质粒pMDL/pRRE(L7)、pRSV-Rev(L8)、pMD.G(L9)共转染293T细胞，成功包装了含GFP、afpIL-15基因的两种慢病毒，能有效感染BJAB细胞，验证了慢病毒载体的活性。　　 (4) ELISA检测结果:PBS转染组及质粒CS-CDF-EG-PRE(LO)和GFP慢病毒转染肿瘤细胞后，均无IL-15的表达;质粒CS-CDF-EF-1-afpIL15-PRE(JA15)转染HCT116细胞24和48小时后上清液中IL-15的表达量为370.47±54.26pg/ml、400.13±56.41 pg/ml, SW480细胞为464.15±95.27 pg/ml、560.45±99.84pg/ml。afpIL-15慢病毒感染BJAB细胞后，IL-15能够高效地表达，表达量为9282.25±721.32pg/ml。　　 结论:成功构建了慢病毒afpIL-15基因表达载体，运用脂质体介导的转染方法，将afpIL-15表达基因有效的导入肿瘤细胞，并可表达IL-15。成功制备了具有感染性的慢病毒，慢病毒感染肿瘤细胞后，IL-15能够高效地表达，为制备AFP特异性T淋巴细胞以及进一步的体内实验打下基础。