论文部分内容阅读
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是重要的DNA肿瘤病毒,与人类多种淋巴系统恶性肿瘤如Burkitt’s淋巴瘤、移植后B淋巴细胞瘤、何杰金氏病(Hodgkin’sdisease,HD)及某些T淋巴细胞瘤等的发生密切相关;并参与某些上皮性肿瘤如鼻咽癌(NPC)、部分胃癌和口腔癌等的发生。潜伏膜蛋白1(latent membrane protein1,LMP1)是EBV基因组BamHⅠNhet片段上BNLF1编码的一种跨膜蛋白,是公认的EB病毒致瘤蛋白,可在体外转化啮齿类动物的成纤维细胞,具有介导细胞增殖、抑制细胞凋亡和细胞分化的功能,与鼻咽癌的低分化有关,并能促进肿瘤的侵袭和转移。研究表明,EBV阳性癌组织中,EBV基因组存在于几乎所有的癌细胞中,而正常细胞均为阴性。提示EBV可能是治疗EBV阳性肿瘤的理想靶点,因此可以利用EBV阳性肿瘤细胞与正常细胞的差异,采用适当的方法选择性地杀伤EBV阳性肿瘤细胞。目的探讨LMP1编码基因沉默对AP-1信号转导通路及其下游与细胞转化、增殖和凋亡等相关因子转录表达的影响。方法应用50nM靶向LMP1功能区编码序列的siRNA649转染EBV阳性胃癌上皮细胞GT38,分别于作用24h,48h,72h,96h,120h时,采用RT-PCR检测c-Jun,Survivin,CDK4和MMP9 mRNA转录水平;免疫组化方法检测靶细胞Survivin蛋白表达;Western Blotting检测c-Jun,JunB和CDK4蛋白表达。结果靶向LMP1特异性siRNA作用后各时间点c-Jun和Survivin mRNA水平均明显低于细胞对照组(P＜0.05),c-Jun以24h时降低最为明显,而Survivin以48h时降低最为明显;CDK4 mRNA水平均明显高于细胞对照组(P＜0.05);转染后24,48,72h时MMP9 mRNA表达水平均明显低于细胞对照组(P＜0.05),96h和120h时MMP9则无明显改变(P＞0.05)。与细胞对照比较,c-Jun和JunB蛋白表达均下调,JunB蛋白表达在作用第5天时有所恢复,CDK4蛋白表达均上调。免疫组化检测结果显示转染后细胞浆中代表Survivin阳性的棕色颗粒明显减少。结论LMP1基因特异性沉默可抑制EBV阳性胃上皮细胞AP-1的生物活性,进而影响下游相关因子的表达。