不同生境家蝇体表携带细菌的多样性研究及家蝇携菌能力评估

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目的本课题包括三方面内容,一是利用传统培养法检测垃圾场和养殖场中家蝇体表携带的菌种,探究各生境间家蝇体表携带细菌的异同,根据检测到的条件致病菌和致病菌协助作业者及周围居住人群做好对特定疾病的预防;二是通过高通量测序的方法检测不同养殖场类型中家蝇体表携带的细菌群落结构,评估不同类型养殖场所面临的疾病风险;三是探索家蝇在实验室条件下对细菌的直接携带能力,评估家蝇传播细菌潜能。方法1.通过传统细菌培养法对家蝇体表细菌的鉴定网捕法捕获家蝇样本后,取其体表洗涤液通过传统细菌培养对细菌种类进行鉴定。2.各养殖场家蝇体表细菌种群多样性对养殖场的家蝇样本利用高通量测序法对其体表携带的菌进行鉴定,分析不同养殖场类型中家蝇体表携带细菌的群落结构。3.家蝇直接携带细菌能力评估实验室饲养家蝇在含有大肠杆菌的培养基上活动一定时间后释放到培养笼中,相应时间后检测其体表细菌含量。结果1.通过传统细菌培养法对家蝇体表细菌的鉴定所有采集点中分离出的细菌经鉴定在属水平上分别隶属于44属,其中养殖场分离出19属,垃圾场分离出34属。2.各养殖场家蝇体表细菌种群多样性经高通量测序建库并去除嵌合体序列过滤后共得到966633条优质序列。在门水平,各养殖场完成分类的细菌多样性跨越了16个细菌门,其中99.5%的序列归类到4个门,即变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌(Actinobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)。在属水平,一共鉴定到了124个属,且各养殖场间细菌多样性差异较大,其中,变形杆菌属(Proteus)在YNC-1-LC和YYC是最具优势的属,克雷伯菌属(Klebsiella)在YNC-2最具优势,丛毛单胞菌属(Comamonas)在YNC-1-NS最具优势,拟杆菌属(Bacteroides)在YZC-1最具优势,库特氏菌属(Kurthia)在YZC-2中最具优势。3.家蝇间接携带细菌能力的评估家蝇爬行含有大肠杆菌的平板后,间隔处理时间为12 h时,爬行30 min、60min、90 min三个实验组的家蝇体表洗脱液的细菌浓度分别降至初始浓度的2/100、2/100、1/100。在24-96 h时维持在原始浓度的1/1000左右,与对照组浓度相近。结论1.在垃圾点中优势菌属为赖氨酸芽孢杆属、节杆菌属、苍白杆菌属和肠杆菌属,养殖场中优势菌属为克雷伯氏菌属、埃希菌属、沙雷氏菌属和变形杆菌属。2.不同生态环境中,家蝇体表菌群结构差异较大,其不仅与生态类型有关,还与地理位置有关。3.家蝇在污浊环境中孳生时间越长,在疾病传播上风险性越高,在接触病原菌后24h内均保持较高的传播风险。
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