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H9N2亚型禽流感病毒在家禽中广泛流行,宿主范围已从禽类扩大到了哺乳动物。内皮细胞被认为在病毒感染期间通过表达多种蛋白分子参与机体的固有免疫反应。具有广谱抗病毒功能的干扰素诱导蛋白IFITM1和IFIT1可以被病毒诱导表达,并通过多种机制抑制病毒的感染和复制。因此,探究H9N2禽流感病毒诱导内皮细胞表达IFITM1和IFIT1的模式及机制,以及诱导的蛋白分子对内皮细胞抗病毒状态的影响具有重要意义。目前,H9N2禽流感病毒诱导IFITM1和IFIT1在内皮细胞上表达的模式、机制,以及诱导的IFITM1、IFIT1对内皮细胞抗病毒反应的影响尚不清楚。为解决这些问题,本研究使用H9N2禽流感病毒A/Chicken/Hebei/4/2008(Ck/HB/4/08))为试验毒株,并用该毒株制作灭活病毒颗粒。以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为主要研究对象来探讨IFITM1和IFIT1的表达情况、表达模式、表达机制以及对细胞抗病毒能力的影响,并选择人支气管上皮细胞(BEAS-2Bs)为对照细胞;以BALB/c小鼠为模型动物来探讨灭活H9N2禽流感病毒颗粒体内诱导IFITM1表达的情况。为探究IFITM1、IFIT1在HUVECs和BEAS-2Bs上的表达情况,首先用空斑形成试验研究了H9N2禽流感病毒能否感染两种细胞并进行增殖;其次,用RT-PCR、Westernblot检测了 H9N2AIV和病毒颗粒接种诱导IFITM1、IFIT1mRNA和蛋白水平的变化。结果表明,H9N2禽流感病毒可以感染HUVECs和BEAS-2Bs,病毒感染和病毒颗粒接种均可以升高IFITM1、IFIT1 mRNA和蛋白的表达水平,且诱导的IFITM1、IFIT1在HUVECs和BEAS-2Bs上的表达模式不同。为了解析H9N2病毒和病毒颗粒诱导IFITM1、IFIT1表达的机制,用ELISA试剂盒检测了病毒和病毒颗粒诱导的干扰素-α/β的表达量,用RT-PCR的方法检测了血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)对IFITM1、IFIT1表达的影响,用免疫荧光的方法检测灭活的病毒颗粒能否进入细胞内。结果表明,灭活的病毒颗粒可以进入细胞;病毒感染和病毒颗粒接种均增加了 BEAS-2Bs中干扰素-α/β的水平,但HUVECs中干扰素-α/β的水平没有显著变化;HA或NA蛋白也不能诱导两种细胞中IFITM1、IFIT1的表达升高。为了探究灭活的病毒颗粒诱导的IFITM1、IFIT1能否介导细胞的抗病毒反应,分别转染了IFITM1、IFIT1特异性的siRNA和CR1SPR激活质粒来敲减或过表达两种蛋白,随后用病毒感染细胞,通过病毒滴度的变化评价两种蛋白的抗病毒效果。结果表明,诱导的IFITM1降低了 HUVECs培养上清中的病毒滴度,而IFIT1对两种细胞培养上清中的病毒滴度均没有影响。表明,诱导的IFITM1介导了 HUVECs的抗病毒反应。我们选择BALB/c小鼠来探究病毒颗粒接种诱导IFITM1体内表达的情况,通过气管给小鼠接种病毒颗粒,分别于接种后不同时间点检测肺组织中IFITM1 mRNA和蛋白的表达水平;为了观察接种病毒颗粒对攻毒小鼠肺组织的保护作用,在给小鼠接种病毒颗粒12h后感染H9N2病毒,感染后1d、3d、5d、7d检测肺组织中IL-6和TNF-α的表达量,第5d检测肺组织的病理变化。结果表明,病毒颗粒接种可以减轻攻毒小鼠肺组织的病变及肺组织中IL-6和TNF-α的水平。综上所述,H9N2禽流感病毒和灭活病毒颗粒不依赖干扰素-α/β的产生就可以诱导IFITM1、IFIT1在HUVECs中的表达,且病毒颗粒诱导的IFITM1可以显著增强HUVECs的抗病毒反应;一次性接种病毒颗粒可以升高肺组织中IFITM1的表达,并在一定程度上减轻病毒感染对肺组织的损伤。