【摘 要】
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蓝斑背肛海兔（Notarchus leachii freeri）,属软体动物门（Mollusca）、腹足纲（Gastropoda）、中后鳃亚纲（Opisthobranchia）、无楯目（Anaspide）、海兔科（Aplysiidae）。其卵群具有药用及食用价值,又被称为“海粉”及“海挂面”。海兔及其卵群含有多种生物活性物质,包括肽、蛋白质、次生代谢物等,其结构和生物活性已被广泛报道。但对于多糖的
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蓝斑背肛海兔（Notarchus leachii freeri）,属软体动物门（Mollusca）、腹足纲（Gastropoda）、中后鳃亚纲（Opisthobranchia）、无楯目（Anaspide）、海兔科（Aplysiidae）。其卵群具有药用及食用价值,又被称为“海粉”及“海挂面”。海兔及其卵群含有多种生物活性物质,包括肽、蛋白质、次生代谢物等,其结构和生物活性已被广泛报道。但对于多糖的研究主要集中在海兔肌肉多糖的结构及活性,对海兔卵多糖的研究未见报道。本论文展开了对海兔卵多糖的提取、分离纯化、结构鉴定以及抗氧化、抗菌及免疫活性等方面进行了系统研究,取得了以下研究成果:（1）通过单因素实验及响应面优化分析,确定了盐法提取海兔卵多糖的最适条件为:Na Cl浓度3%、料液比1:40 g/m L、提取时间2 h、提取温度69°C,在此条件下,海兔卵多糖得率实际值为4.20±0.28%。对多糖得率的影响因素从大到小依次为:提取时间>液料比>提取温度>Na Cl浓度。（2）海兔卵多糖溶液通过Sevage法除蛋白,醇沉等步骤后得到淡黄色絮状物海兔卵粗多糖（NLCEP）。经DEAE-Cellulose 52离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析进一步分离纯化后,共得到2个多糖组分,分别为水洗组分NLCEPs-1和1mol/L Na Cl盐洗组分NLCEPs-2。对NLCEPs-1和NLCEPs-2的进行化学结构分析,结果表明两种多糖均为均一多糖组分。NLCEPs-1的分子量为31.4 k Da,主要由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,5种单糖占比为11.13:63.77:5.44:6.59:13.08。NLCEPs-2的分子量为4176.8 k Da,主要由鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和木糖组成,单糖占比为1.24:8.35:10.01:65.74:14.66。结合红外光谱及核磁共振结果分析得出,NLCEPs-1中的糖苷键残基主要有→)4-α-D-Glcp（1→、→6）-α-D-Glcp（1→、→1）-β-D-Galp和β-D-Galp-（1→;NLCEPs-2主要含有三个糖苷键残基,分别为→）4-α-D-Galp A6Me(1→、α-D-Glc-（1→和→6）-β-Glcp-(1→。（3）以小鼠巨噬细胞RAW264.7为模型,研究了海兔卵多糖体外免疫调节活性。结果发现,海兔卵多糖NLCEP、NLCEPs-1和NLCEPs-2在100-1000μg/m L的浓度范围内能显著提高吞噬中性红的能力,并显著促进NO释放量及细胞因子TNF-α、IL-6的分泌,同是促进i NOS、IL-6与TNF-αm RNA的表达,且NLCEPs-1的免疫调节能力较NLCEPs-2强。（4）研究了海兔卵多糖体外抗氧化及抑菌活性。采用多糖对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子的清除能力及总还原能力的方法测定多糖的抗氧化活性。采用多糖对常见菌种的抑菌圈大小的方法测定海兔卵多糖的抑菌效果。结果表明,NLCEP、NLCEPs-1和NLCEPs-2均能够清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基,同时三者均具有一定的还原力。在抑菌活性方面,除枯草芽孢杆菌外,三种多糖对不同菌种均具有一定的抑制作用。总体而言,海兔卵纯化多糖NLCEPs-2对革兰氏阳性菌抑菌效果最好,海兔卵粗多糖NLCEP对革兰氏阴性菌抑菌效果最好。海兔卵纯化多糖NLCEPs-1的抑菌效果相对较弱。
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