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目的:动脉粥样硬化是一种以血管壁脂质沉积、泡沫细胞形成为特点的慢性炎症反应,巨噬细胞在这种慢性炎症的发生发展中起到了关键作用。固有免疫参与了这一慢性炎症过程,而NLRP3炎症通路是固有免疫中的重要环节。越来越多的研究显示微小RNA参与炎症发生的调节过程。在众多微小RNA中,miR-181家族在慢性炎症反应中的作用受到广泛关注。而既往没有相关文献研究miR-181a对NLRP3的作用,故本实验意在研究miR-181a是否在ox-LDL刺激下的人类THP-1源性巨噬细胞炎症模型中对NLRP3炎症通路有调节作用以及探索其可能的机制。方法:用佛波酯(PMA)刺激人THP-1细胞24小时使其分化成为贴壁巨噬细胞,然后分别用时间梯度和浓度梯度的ox-LDL刺激贴壁的THP-1源性巨噬细胞,检测各组miR-181a表达水平,根据qrt-PCR结果选取12h,50ug/ml为ox-LDL的合适的刺激时间与刺激浓度。在给予ox-LDL组细胞50ug/ml ox-LDL处理12h后,分别检测miR-181a、MEK/ERK/NF-κB以及NLRP3炎症通路相关炎症因子表达情况。为进一步研究miR-181a对NLRP3炎症通路相关蛋白的表达是否有影响,我们将细胞分为6组:对照组,ox-LDL组,ox-LDL+miR-181a mimics组,ox-LDL+miR-181a mimics negative control组,ox-LDL+miR-181a inhibitors组,ox-LDL+miR-181a inhibitors negative control组,分别检测MEK/ERK/NF-κB以及NLRP3炎症通路相关炎症分子的表达情况。利用Target scan7.1以及双荧光素酶报告基因预测并寻找miR-181a的靶基因。为探讨miR-181a是否是通过靶向作用MEK1调节NLRP3炎症通路,我们将细胞分为6组:对照组,ox-LDL组,ox-LDL+miR-181a inhibitors+U0126组,ox-LDL+miR-181a inhibitors组,ox-LDL+miR-181a inhibitors negative control+U0126组,ox-LDL+miR-181a inhibitors negative control组。各组miR-181a的表达状况用qrt-PCR检测,MEK/ERK/NF-κB及NLRP3炎症通路相关炎症分子蛋白表达用Western blot检测。结果:与对照组(空白组)相比较,THP-1巨噬细胞在给予ox-LDL刺激后,miR-181a表达量明显下降,MEK/ERK/NF-κB炎症通路激活并伴随NLRP3炎症通路相关蛋白(NLRP3,CASPASE1,IL-18,IL-1β)表达上调。当外源性过表达miR-181a后再给予细胞ox-LDL刺激,则THP-1巨噬细胞内MEK/ERK/NF-κB炎症通路活化程度下降并伴随NLRP3炎症通路相关蛋白(如NLRP3,CASPASE1,IL-1β、IL-18等)表达量下调,外源性敲降miR-181a则表现出与过表达组相反的结果。利用双荧光素酶报告分析,我们验证MEK1是miR-181a的直接靶基因,miR-181a可以靶向抑制MEK1的表达。为进一步验证miR-181a是通过靶向作用于MEK1影响NLRP3炎症通路的激活,我们在外源性敲降miR-181a组细胞给予MEK特异性抑制剂U0126处理,发现U0126可以在一定程度上翻转miR-181a敲降后引起的MEK/ERK/NF-κB激活增加、NLRP3及其相关炎症分子表达上调的现象。换言之,U0126可以在一定水平上模拟miR-181a的作用。结论:我们的研究结果显示miR-181a在ox-LDL刺激的人类THP-1源性巨噬细胞炎症模型中通过靶向作用于MEK1影响MEK/ERK/NF-κB炎症通路活性进而调节下游NLRP3炎症通路的激活。