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目的采集正常产妇脐血进行HCMV系列实验室检测,分析正常产妇分娩新生儿的HCMV先天性感染率。同时应用流式细胞术检测正常产妇脐血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分比,并计算CD4+∕CD8+的比值,探讨HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性,进一步结合追踪患儿的临床表现,为HCMV先天性感染的有效预防和免疫治疗及临床妊娠干预提供科学依据。方法自2009年12月～2011年3月于合肥市妇幼保健院采集正常产妇36例脐血标本,按实验设计分别作如下处理:（1） HCMV病毒分离:取2ml脐血抗凝血,分离白细胞后接种到人胚肺成纤维细胞（HELF）培养物上,逐日于倒置显微镜下观察HCMV致细胞病变效应（Cytopathic effect, CPE）;（2）从分离的脐血白细胞中提取总DNA分别进行巢式PCR法和荧光定量PCR法检测;（3）将分离的脐血白细胞进行HCMV-pp65抗原血症检测;（4）从36例脐血标本中分别取0.5ml脐血,采用流式细胞术检测脐血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的百分比,并计算CD4+∕CD8+的比值,结合追踪患儿的临床表现,分析新生儿HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性;（5）将巢式PCR扩增后的阳性标本测序,并与基因数据库序列比对,进一步证实巢式PCR扩增产物是HCMV gB基因。结果（1）病毒分离:分别将36份脐血白细胞接种于HELF细胞培养物上,盲传三代有5份标本出现HCMV特征性CPE,病毒分离率为13.9%（5∕36）;（2） HCMV-pp65抗原血症检测有6份为阳性,阳性率为16.7%（6∕36）,与病毒分离一致率为97.2%,其中共同阳性一致率为83.3%;（3）巢式PCR法检测结果:将36份脐血标本中提取的DNA分别进行HCMV UL55基因巢式PCR扩增, HCMV UL55 DNA的阳性率为22.2%（7∕36）,与病毒分离一致率为94.4%,其中共同阳性一致率为71.4%;（4）荧光定量PCR检测结果:将36份脐血标本中提取的DNA分别取2μl进行荧光定量PCR扩增,根据试剂盒规定的阳性结果判定标准,荧光定量PCR法检测HCMV-DNA的阳性率为30.6%（11∕36）,与病毒分离一致率为83.3%,其中共同阳性一致率为45.5%;（5）巢式PCR扩增产物的测序结果:巢式PCR阳性标本测序结果与设计的序列相一致,并与基因数据库序列比对,证明为HCMV gB2型。（6）流式细胞术检测T淋巴细胞亚群变化的结果:脐血标本中荧光定量PCR阳性组与荧光定量PCR阴性组CD3+淋巴细胞含量分别为（73.11±8.88）%和（71.66±8.59）%,差异无统计学意义（P﹥0.05）;荧光定量PCR阳性组与荧光定量PCR阴性组CD4+淋巴细胞含量分别为（47.52±8.53）%和（52.476±7.25）%,差异无统计学意义（P﹥0.05）,但荧光定量PCR阳性组CD4+淋巴细胞含量与荧光定量PCR阴性组相比较,有下降趋势;荧光定量PCR阳性组与荧光定量PCR阴性组CD8+淋巴细胞含量分别为（25.84±4.75）%和（18.07±4.06）%,荧光定量PCR阳性组CD8+淋巴细胞含量高于荧光定量PCR阴性组且差异有统计学意义（P﹤0.01）;荧光定量PCR阳性组与荧光定量PCR阴性组CD4+∕CD8+比值分别为1.89±0.45和3.026±0.75,荧光定量PCR阳性组CD4+∕CD8+比值低于荧光定量PCR阴性组且差异有统计学意义（P﹤0.01）。（7）结合新生儿临床出生资料发现,有一例HCMV先天性活动性感染新生儿表现为宫内发育迟缓,其HCMV病毒分离、HCMV-pp65抗原血症检测、HCMV UL55基因巢式PCR检测和HCMV-DNA荧光定量PCR检测均为阳性,CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞含量分别为66.4%、36.2%、29.5%,CD4+∕CD8+比值为1.21。结论（1）根据病毒分离结果作为“金标准”,初步确认判定HCMV先天性活动性感染的指标是:经测序证实的PCR检测HCMV IE、UL83基因阳性和巢式PCR检测UL55基因阳性及HCMV-pp65抗原血症阳性者。（2）通过对36份正常产妇脐血标本进行病毒分离、HCMV-pp65抗原血症检测、HCMV UL55基因巢式PCR检测和HCMV-DNA荧光定量PCR检测,并比较,本次研究中正常产妇分娩的新生儿HCMV先天性感染率为30.6% ,其中,HCMV先天性活动性感染率为16.7%。（3）利用流式细胞术测定36份脐血标本中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的百分比,并计算CD4+∕CD8+的比值。发现荧光定量PCR阳性组CD4+淋巴细胞含量与荧光定量PCR阴性组相比较,有下降趋势;荧光定量PCR阳性组CD8+淋巴细胞含量高于荧光定量PCR阴性组且差异有统计学意义（P﹤0.01）;荧光定量PCR阳性组CD4+∕CD8+比值低于荧光定量PCR阴性组且差异有统计学意义（P﹤0.01）。并且发现一例HCMV先天性活动性感染的新生儿出生时体重下降。分析发现,该新生儿的检测结果符合先天性活动性感染的判定指标,并且有CD8+淋巴细胞的百分比升高,CD4+∕CD8+比值下降,提示机体的细胞免疫功能降低,表明HCMV先天性活动性感染与脐血T淋巴细胞亚群即机体细胞免疫应答状态的改变密切相关。（4） 36例被检测新生儿中有一例新生儿出生时体重仅2.2千克,符合宫内发育迟缓的诊断标准。表明迫切需要尽快建立随访档案,定期对HCMV先天性活动性感染的新生儿上门体检。