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背景和目的:血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）可以激活血管外膜成纤维细胞（adventitial fibroblasts,AFs）,并参与血管损伤后的血管重塑和局部炎症反应,但具体机制仍不清楚。蛋白酶活化受体（Protease-activated receptor,PAR）1和2在纤维发生和炎症性疾病中都有重要作用。本研究为了探讨PAR1和PAR2是否参与Ang Ⅱ诱导的AF细胞的激活和血管外膜重塑的过程,为治疗血管重塑性疾病提供新的作用靶点。方法:选取6-8周SD大鼠,用组织贴块法培养原代AFs。分别用PAR1激动剂（PAR1-AP,TFLLR-NH2）和PAR2激动剂（PAR2-AP,2-furoyl-LIGRLO-NH2）刺激AFs,用CCK8方法（cell counting 8 assay）检测细胞增殖,用划痕实验（wound scratch assay）检测细胞迁移,用蛋白免疫印迹实验（Western blot）检测细胞表型转化的标志蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）,纤维化蛋白如胶原I（collagen I）、纤维粘连蛋白（fibronectin）,以及转化生长因子β（transforming growth factorβ,TGF-β）的表达,用实时定量聚合酶链式反应（real-time PCR）检测炎症因子白介素-6（Interleukin-6,IL-6）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）的转录水平。用PAR1抑制剂（SCH79797）和PAR2抑制剂（ENMD-1068）提前处理细胞,再用Ang Ⅱ处理细胞,用上述方法检测细胞的增殖、迁移、MAPK信号通路、纤维化蛋白的表达、炎症因子的表达是否有变化。用Ang Ⅱ刺激AFs,用Western blot检测细胞PAR1和PAR2的表达是否增加,并用免疫荧光检测PAR1和PAR2的内吞,再用AT1受体抑制剂氯沙坦和AT2受体抑制剂PD123319处理细胞,观察PAR1和PAR2的表达、内吞有无变化。最后用免疫荧光检测正常组和Ang Ⅱ灌注组大鼠血管外膜PAR1和PAR2表达有无变化以及和α-SMA、MCP-1是否有共表达。结果:PAR1和PAR2激活可以促进AFs的活化,表现为AFs增殖、纤维化蛋白collagen I、fibronectin表达增加,α-SMA表达增加,炎症因子IL-6和MCP-1表达增加。ERK信号通路在细胞增殖中起作用,TGF-β/p-Smad2信号通路在促纤维化中起重要作用。PAR1和PAR2抑制剂可以抑制Ang Ⅱ引起的AFs增殖、迁移、纤维化蛋白表达增加和炎症因子的增加。Ang Ⅱ可以通过AT1受体增加AFs的PAR1和PAR2表达,并且能通过AT1受体引起PAR1和PAR2的反式激活。与正常组对比,Ang Ⅱ灌注组大鼠血管外膜PAR1和PAR2表达增加,并同时伴随α-SMA和MCP-1表达增加。结论:PAR1和PAR2激活可以直接引起AFs的激活,包括增殖、促纤维化、促炎作用增加,PAR1和PAR2的激活可以参与Ang Ⅱ引起的AFs的激活,这一作用与Ang Ⅱ可以增加PAR1和PAR2的表达,引起PAR1和PAR2的反式激活有关,这为血管重塑性疾病提供了一个新的治疗靶点。