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本课题主要探讨了基本培养基、外植体种类、培养条件、植物生长调节剂等因素对大豆愈伤组织诱导、继代培养的影响,并对大豆愈伤组织的成分进行分析研究,主要取得了以下研究结果:
大豆种子的消毒条件:用75%酒精消毒1min,无菌水冲洗1次,然后用2%的NaClO溶液中浸泡15min或者用0.1%HgCl2处理10min,用无菌水冲洗4次,消毒效果比较好。
比较MS、B5、N6三种基本培养基,发现MS适合作为诱导大豆愈伤组织的基本培养基。添加激素6-BA0.5mg/L,2,4-D2.0mg/L时愈伤组织诱导的效果最好,过高或过低的浓度激素均不利于愈伤组织的诱导和生长;不同外植体诱导愈伤组织的能力不一样,下胚轴诱导愈伤组织能力强于子叶;在所选择的六种大豆品种中,中黄十三诱导愈伤组织的能力最强;光照条件为12h/d时有利于愈伤组织的诱导;培养基pH5.8~6.0时,愈伤组织的诱导率比较高。
大豆愈伤组织继代培养的最佳条件:以MS+BA0.5mg/L+2,4-D2.0mg/L为培养基,pH在5.8~6.0之间,在1000~1500Lx,2h/d光照条件下,培养21d后生长较好,愈伤组织生长量和增长倍数可分别达到11.23g/瓶和10.23。
通过化学试剂法和薄层色谱法对大豆愈伤组织提取液成分分析,里面含有异黄酮成分;用HPLC法测定,每1.00g干重的大豆愈伤组织含染料木素112.67μg,大豆苷元86.38μg。