乐果（dimethoate）是一种常用的中等毒性有机磷农药 (organophosphate pesticides)，主要用作农业杀虫剂。由于其杀虫的高效性和环境低残留性，以及价格低廉，在我国得到广泛应用，是目前我国主要使用的有机磷农药。它的毒作用机制与其它有机磷农药一样，通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)活性，引起胆碱能神经功能亢进的表现。同时，胆碱能受体也受到影响，长期持续低剂量接触可以引起胆碱能受体与[3H]二苯羟乙酸奎宁酯（[3H]quinuclidinyl benzilate, [3H]QNB）结合减少，即胆碱能受体的“负向调节”（down-regulation），这种现象是机体对胆碱能亢进的适应，即长期接触有机磷农药诱发的耐受现象。本课题通过动物实验、人群研究和细胞培养的方法，系统研究了乐果毒性效应与M受体变化的关系，并通过对人外周血淋巴细胞的研究，探索将淋巴细胞M3基因表达应用于有机磷农药中毒生物监测的可能性。急性乐果染毒，全血AChE和脑AChE活性受到抑制，呈一定的剂量-效应关系，50 mg/kg乐果使全血AChE的活性下降到至低水平，脑组织AChE活性改变同全血平行。因此急性有机磷染毒过程中，全血AChE活性可以反映脑组织AChE活性改变。14天和28天低剂量乐果诱导染毒过程中，全血AChE活性下降至更低水平，随诱导染毒时间延长越明显，脑组织AChE活性随着诱导染毒时间越长，AChE活性却有一定程度的恢复。但是无论诱导时间长短，再次接触较高剂量的乐果后，全血和脑AChE活性均进一步下降，随激发剂量升高而下降，二者变化趋势一致。急性接触乐果不但引起全血和脑组织乙酰胆碱酯酶的改变，而且对M1、M2受体的密度和亲和力都有影响，受体的密度随乐果接触剂量增加呈下降趋势，而亲和力呈上升趋势。14天和28天诱导染毒均可以使动物产生对乐果毒性的耐受，耐受动物在此接触较高剂量乐果，虽然不表现出明显中毒症状，但是M受体密度和亲和力仍能发生改变。但低剂量乐果诱导时间延长，这种改变越不明显。脑组织中M1受体密度的下降与其mRNA表达水平变化相一致，说明M1受体基因表达的下降是M1受体密度下降的可能机制。M2受体基因表达水平和其密度改变没有一致关系，提示M2受体基因调控和M1受体可能具有不同的机制，尚需进一步研究。<WP=7>14天诱导染毒的大鼠外周血淋巴细胞M3基因表达同脑组织中M1受体的基因表达变化趋势一致，而28天诱导染毒大鼠外周血M3基因的诱导表达可以反映脑组织中M1基因表达水平。人群研究发现，接触乐果的工人外周血淋巴细胞M3基因诱导表达高于基础表达，而正常人群外周血淋巴细胞M3基因诱导表达是低于基础表达的。人外周血淋巴细胞M3基因的基础表达水平并不能反映是否接触乐果农药，而M3基因诱导表达可能可以反映机体累计接触。通过对SK-N-SH细胞的研究，在急性接触乐果时，M受体的mRNA表达水平还没有发生改变。考虑到机体对乐果的代谢作用，以及体外和体内实验的区别，尚需要进一步研究乐果对细胞受体基因表达的影响。本课题以乐果为有机磷农药的代表，系统研究有机磷的毒性效应和M受体、胆碱酯酶的关系，为丰富有机磷毒作用机制理论提供了实验基础，阐明了接触有机磷引起的M受体蛋白水平和基因水平的改变，并提出以外周血淋巴细胞M3受体基因表达作为有机磷毒性的生物标志物。