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本文采用传统的细菌分离培养方法和DGGE非培养方法对青藏铁路沿线23个不同地区土壤的细菌群落多样性及群落动态变化进行了研究。利用多种不同类型的培养基(R2A、嗜盐、嗜碱、无氮阿须贝等),通过传统的细菌分离培养方法从23种不同的土壤中分离筛选可培养细菌2249株,根据菌落菌体形态及地域特征,选择了1043株菌进行了16S rRNA基因序列的扩增并序列测序,通过与GenBank已知序列进行比对分析。结果表明,1043株细菌分属于83个类群,其中,假单孢菌属、芽孢杆菌属、节杆菌属和链霉菌属为最常见类群。本文章根据采样地点土壤质地、植被利用方式及气候特点的不同,对各个地区的细菌数量、主要细菌类群及多样性进行了较为系统的分析。利用细菌通用引物,对从青藏高原23个地区土壤样品中提取的总DNA进行16S rRNA基因的聚合酶链式反应(PCR)扩增,采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对PCR产物进行分析,以揭示青藏高原土壤中细菌群落结构的多样性。DGGE图谱中的主要条带的序列分析结果显示,青藏高原23个土壤样品中细菌群落大多数为非培养细菌(Uncultured bacterium)。DGGE图谱分析结果显示,青藏高原土壤细菌群落多样性受土壤类型,植被特点及海拔高度等因素的影响。纯培养方法从青藏高原铁路周边23种不同地区土壤中得到的细菌群落与DGGE检测到的群落多样性相比,发现利用非培养检测到的群落较培养方法得到的明显丰富。纯培养得到常见菌群为假单孢菌属、芽孢杆菌属、节杆菌属和链霉菌属。而对DGGE图谱中的主要条带序列分析结果显示,非培养细菌(Uncultured bacterium),根瘤菌(Sinorhizobium),不动杆菌属(Acinetobacter),黄单胞菌属(Xanthomonas)为优势菌属。可见非培养方法与培养方法结果差别较大。可培养的细菌中,编号为R43,R101,R720三株菌其16S rRNA基因序列在NCBI Blast中比对发现与Sphingomonas属的Sphingobium vermicomposti同源性最高为97.4—97.7% ,且分离生境差异较大。以Sphingobium vermicomposti的模式菌ACCC05496=DSM21299~T为参比菌株,采用多相分类的方法,对其形态学特征、生理生化特征、API鉴定系统、Biolog、脂肪酸成分组成分析(MIDI)、G+Cmol%测定及16S rRNA基因序列的系统发育分析等进行分析。实验结果初步证实,R43,R101,R720三株菌代表Sphingobium属中的新种。