本研究应用糖谱法对6种茶源多糖建立一种特异性强、选择性高的表征多糖化学特征性图谱的新方法,为茶源多糖质量控制研究提供思路;同时,在酶法修饰后,结合体外抗氧化生理活性指标,进一步筛选出活性强的多糖酶解产物,为茶源多糖保健食品开发提供实验依据。主要工作内容如下:1.基于星点设计-响应面的茶多糖优化提取和分离除杂选用具有精度更高的非线性数学模型拟合方法,引入星点设计CCD方法,结合效应面RSM首次报道了优选茶树花的制备工艺。在单因素实验基础上,最佳方法结果为:料液比1:14.5,时间2.08,温度79.1℃。比较预测值和实验值的偏差绝对值均小于5%。结果表明,所建立的数学模型具有良好的预测性,所选茶树花多糖提取工艺条件重现性好。采用沸水提醇沉法提取得到6种粗多糖(人工高硒多糖、人工低硒多糖、人工空白多糖、天然富硒多糖、邓村绿茶多糖、茶树花多糖),其中总糖含量由大到小为人工空白多糖>茶树花多糖>邓村绿茶多糖>人工低硒多糖>人工高硒多糖>天然富硒多糖,茶树花多糖较高。BCA法分析可知,多糖中还存在一定含量的蛋白,说明所得多糖均为糖蛋白。2.基于糖谱法的茶多糖GPC图谱构建、分子量及单糖测定糖谱法是针对多糖结构特征建立的一种特异性强、选择性高的表征多糖化学特征性图谱的新方法,不同茶源多糖建立的指纹凝胶色谱GPC具有一定特异性,存在3-4个峰。在最适酶解后,对比酶解前后结果发现,酶解GPC特征指纹图谱能很好的指向多糖的分子量质量和分布,如需要区分人工低硒多糖和茶花多糖、高硒多糖、天然富硒多糖等其他茶源多糖,在透明质酸酶催化作用后,人工低硒多糖并没有出现相应的新峰或峰的消失,然而其他多糖均有新峰的产生,从而实现对不同茶源多糖的快速有效区分。分子量分布结果表明,六种多糖均属于粗多糖,存在3-4个分子峰,分子量分布主要在20万左右和200-300万重均分子量,均存在寡糖片段。不同糖苷酶水解后,不同茶源多糖呈现出不同水解糖片段。如茶树花多糖存在四个峰,重均分子量分别是2573536,249052,4650.88,690.30,人工低硒多糖存在三个峰,重均分子量分别是3667830,272319,1342.82。不同茶源多糖在酶解前后的对于茶树花多糖为而言,加入纤维素酶后,分子量分布为10万和200万为主,跟原茶树花相比,分子量分布为20万和200万,说明茶树花多糖的主链上存在β-1,4-葡萄糖苷键,对于主链也有一定作用;此外,原茶树花多糖的其他分子量分布为4650.88、690.30,纤维素酶催化水解后重均分子量为1535.89、407.11、133.25,小片段的糖链出现说明纤维素酶可能有效水解茶树花多糖支链。单糖组成分析表明,人工高硒多糖、人工低硒多糖、人工不富硒多糖、天然富硒多糖、邓村绿茶多糖、茶树花多糖均含有鼠李糖、果胶糖(阿拉伯糖)、半乳糖、葡萄糖,具有高度相似的单糖组成。因此,本实验方法有利于表征茶源多糖的大分子特性,可为茶源多糖质量控制作参考。3.茶多糖的酶法修饰改性及其对体外抗氧化活性研究酶法修饰改性是获取高活性茶多糖的重要手段。首先,建立了一种基于96孔板体外抗氧化(DPPH)筛选方法,最佳条件为:总反应体积设置为200ul(多糖样品50ul和DPPH溶液150ul),孵育温度设置为25℃,避光显色反应30分钟,514nm测定。不同酶解后,六种多糖的活性相差较大,其中茶树花多糖活性较好,果胶酶酶解后抗氧化活性最好,如茶树花多糖EC50为177.2ug/ml,与葡聚糖酶酶解后活性相当,EC50为183.5ug/ml,果胶酶酶解后和纤维素酶酶解后的活性相当,EC50为162.6ug/ml、166.9ug/ml,DPPH清除能力提高了8.2%、6.1%。结果提示,用糖苷酶适当水解茶多糖能够提高其清除自由基能力,达到改善其活性的目的。茶多糖酶法修饰后活性提高与其分子链变化有较大关联,茶多糖经过酶法修饰改性后无论是重均分子量还是数均分子量都明显变小,酶法修饰后出现的小片段糖片段分散系数多数为1.0-1.3,提示茶多糖分子链转变为相对均一性。结合多糖的化学组分分析,发现多糖都具有糖缀合物的特性。对于人工不富硒多糖而言,不同酶酶解后其活性没有得到反而降低,说明酶解后使得多糖抗氧化活性结构被水解或破坏,导致EC50较大。相比邓村绿茶和茶树花多糖,人工高硒和人工低硒多糖抗氧化活性不是很好,说明硒元素在抗氧化活性方面不是其显著特征。