论文部分内容阅读
目的:1.验证点阵Er: YAG激光辅助干扰素递送对兔耳增生性瘢痕治疗的有效性;2.观察治疗后瘢痕内成纤维细胞凋亡情况,检测瘢痕组织细胞因子VEGF、MMP-1、TGF-β1及I型胶原的变化,以探讨点阵激光辅助干扰素递送治疗增生性瘢痕可能的作用机制,为临床治疗的有效性提供理论依据。方法:1.健康成年新西兰大耳白兔40只制作兔耳增生性瘢痕动物模型。兔双耳腹侧皮肤局麻下每侧作6个直径为9mm的圆形创面,完整去除皮肤全层及软骨膜,保留软骨。2.按随机化方法将瘢痕分为三组,治疗组行点阵Er: YAG激光治疗后即刻给予干扰素α-2b凝胶涂抹,并应用电离子导渗仪导入10分钟,随后再次涂抹凝胶并封包24小时;对照组给予点阵Er: YAG激光治疗;空白组不予治疗。3.治疗后1、3、7、14、30天分别测量各组瘢痕厚度计算瘢痕增生指数并切取瘢痕。HE染色观察瘢痕组织病理变化。TUNEL检测瘢痕组织内细胞凋亡情况。免疫组化方法检测瘢痕组织中VEGF和MMP-1的表达变化。Real-time PCR技术检测VEGF、MMP-1、TGF-β1及Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果:1.大体观察:术后28天形成质硬、红色的增生性瘢痕。治疗组与对照组治疗后即刻可见瘢痕表面MTZ区点状出血,治疗组给予干扰素涂抹并导入后及治疗后1天、3天瘢痕颜色较对照组变暗;治疗组与对照组均于治疗后7天开始瘢痕颜色变浅。治疗后14天、30天治疗组、对照组瘢痕增生指数下降,治疗组比对照组下降更明显,瘢痕变软、变平。治疗后30天治疗组瘢痕完全消退,对照组瘢痕基本变平;空白组治疗后30天瘢痕颜色、质地及高度均未见明显变化。2. HE染色组织学观察:治疗后即刻及治疗后1天,治疗组较对照组红细胞外渗范围更广,可达MTZ较远组织;治疗后治疗组与对照组血管数量逐渐减少,治疗后1天、3天及7天治疗组较对照组血管数量减少更明显;治疗后治疗组与对照组成纤维细胞逐渐减少,胶原逐渐趋于平行排列。3. TUNEL检测成纤维细胞凋亡:在角朊细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞中可见凋亡细胞。治疗组与对照组治疗后成纤维细胞凋亡率逐渐增高,治疗后7天达高峰,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后1天、3天治疗组比对照组凋亡率更高,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后30天空白组可见大量凋亡细胞。4. VEGF蛋白及mRNA表达:免疫组化结果显示治疗组、对照组于治疗后7天开始VEGF阳性率逐渐降低,治疗后7天、14天、30天两组表达率明显低于空白组,且差异均有统计学意义(P<0.01)。治疗后7天、14天治疗组比对照组VEGF表达率低,且差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR结果显示治疗后7天开始VEGFmRNA表达量逐渐下降,治疗后7天、14天、30天,治疗组、对照组均比空白组表达量低,治疗组比对照组表达量低,且差异有统计学意义。5. MMP-1蛋白及mRNA表达:免疫组化结果显示治疗组与对照组治疗后表达逐渐升高,7天达高峰,治疗组与对照组表达量高于空白组,差异有统计学意义,治疗组高于对照组,差异有统计学意义。Real-time PCR结果显示治疗组与对照组治疗后MMP-1mRNA表达量逐渐升高,治疗后7天达峰值,空白组表达量未见明显变化。治疗后治疗组高于对照组和空白组,对照组高于空白组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。6. TGF-β1mRNA的表达:Real-time PCR结果显示治疗后治疗组与对照组表达量逐渐下降,治疗组较对照组和空白组降低,且差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后3天、7天、14天、30天对照组较空白组降低,且差异有统计学意义(P<0.01)。空白组治疗前后变化不明显。7. I型胶原mRNA的表达:Real-time PCR结果显示治疗前各组I型胶原mRNA相对表达量最高,治疗后治疗组与对照组I型胶原mRNA相对表达量逐渐下降,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后3天、7天、14天、30天治疗组比对照组下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。空白组治疗前后变化不明显。结论:1.点阵Er: YAG激光辅助干扰素递送比单独应用点阵Er: YAG激光治疗效果更明显,可以迅速促进瘢痕的软化、消退。2.点阵Er: YAG激光可以促进成纤维细胞的凋亡,激光辅助干扰素透皮吸收后,成纤维细胞的凋亡率明显增高。3.点阵Er: YAG激光能降低兔耳增生性瘢痕组织中VEGF的分泌和表达,激光辅助干扰素透皮吸收后,VEGF下降更明显,可能是其治疗增生性瘢痕的机制之一。4.点阵Er: YAG激光辅助干扰素递送可以使兔耳增生性瘢痕组织中TGF-β1的表达下降,上调MMP-1的表达,降低组织中I型胶原含量,可能是其治疗增生性瘢痕的机制之一。