白术活性多糖的分离纯化及组成研究

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本课题以湖南平江产地白术干燥根茎为原料,对白术活性成分-多糖进行提取、分离、纯化、分子量的测定及组成研究。通过方法学比较,首次确定白术活性多糖含量测定的最佳方法,试验表明采用苯酚-硫酸法测定白术多糖含量,操作简便,稳定可靠,适于基层单位使用,在此条件下测得白术水提浸膏中粗多糖(CAMP)含量为41.77%。通过对醇沉浓度、脱蛋白、脱色效果进行考察,优化白术多糖分离纯化方案。结果表明:采用85%乙醇沉淀,三氯乙酸(TCA)脱蛋白,活性炭脱色:温度60℃,时间15 min,活性炭加入量为1%,pH为4.5,纯化效果最佳,得白术精多糖(RAMP)。RAMP采用DEAE-52柱层析得RAMP-1 RAMP-2、RAMP-3,RAMP-1继以Sephadex G-100柱层析,得一单峰。本课题首次采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)检测白术多糖的重均分子量。采用T5、T10、T20、T40、T70不同分子量的标准葡聚糖系列,以保留时间为横坐标,重均分子量的对数值为纵坐标建立标准曲线,计算样品多糖的重均分子量(Mw)。试验结果表明Mw在5000~70000范围内线性关系良好,所得标准曲线回归方程为:lgMw=-0.303tR+3.4816,r=-0.9900,测得样品多糖重均分子量为32767。采用该法操作简便,方法重现性较好,准确性较高。本课题对RAMP的组成进行研究,通过红外光谱(IR)、纸色谱(PC)、气相色谱(GC)分析、气-质联用色谱(GC-MS)、气相-声表面波传感器(FGC/SAW)确定白术精多糖RAMP的结构及其组成。IR显示RAMP具有典型的多糖吸收峰,GC、GC-MS及FGC/SAW检测得RAMP单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖,其摩尔比为1:0.74:1.88:1.07。FGC/SAW作为一种新型气相色谱,用于多糖组成的研究,其快速的检测速度预计在药物分析领域具有广阔的应用前白术作为一种药食同源的植物,近年来,其活性成分多糖的增强免疫功能,抗氧化,降血糖等作用越来越受到医药行业的关注,它独特的功能,有望成为一种极具开发潜力和开发价值的保健品和药品。本文对湖南平江白术活性成分多糖进行研究,为平江白术的进一步开发提供实验依据,也为充分利用和发展湖南平江的天然植物资源具有重要的科学意义。
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