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本文以闽浙马尾杉内生真菌Hypoxylon investiens NX9为实验材料,探讨炭团菌NX9(Hypoxylon investiens)次级代谢产物及其药用价值,主要研究内容和结果如下:1.炭团菌NX9发酵方式选取:对炭团菌NX9分别进行2 L固体发酵和液体发酵,用乙酸乙酯法萃取,分别获得90.0 mg/L和74.0 mg/L粗提物。随后进行粗提物对乙酰胆碱酯酶的活性抑制实验,结果显示5 mg/mL液体粗提物对乙酰胆碱酯酶活性抑制率为15.80%,比固体发酵粗提物的酶活抑制率10.82%高4.98%,结合两种粗提物薄层层析显色图结果,选择炭团菌NX9发酵方式为液体发酵。2.炭团菌NX9发酵培养基优化:以5 mg/mL炭团菌NX9液体发酵粗提物对乙酰胆碱酯酶活性抑制率为指标对炭团菌NX9液体发酵培养基进行单因素优化,结果表明最佳发酵培养基配方为20%马铃薯,8%葡萄糖、8%甘露醇,1%硫酸铵,0.05%磷酸二氢钾、0.05%氯化钙和0.05%氯化钠,装液量为100 mL,共发酵300 mL,培养10 d,获得粗提物0.071 g,对乙酰胆碱酯酶抑制率为34.19%。在单因素优化基础上,采用响应面法进一步对炭团菌NX9液体发酵条件进行优化,采用Plackeet-Burman设计进一步优化转速、pH和温度,得出粗提物抑制乙酰胆碱酯酶活性最适发酵条件:温度28.96℃、pH 7.53和转速193.63 rpm。在此条件下发酵炭团菌NX9共300 mL,5 mg/mL粗提物对乙酰胆碱酯酶抑制率提高到48.64%。3.炭团菌NX9发酵产物分离纯化及结构解析:采用优化后的培养基,以液体发酵方式进行炭团菌NX9发酵20 L,乙酸乙酯萃取得到4.448 g粗提物,采用多种色谱分离技术和核磁波谱分析对粗提物进行分离纯化与结构解析,获得9种化合物,其中 8 种化合物(ZHO1、ZH02、ZH03a、ZH03b、ZHOB2、ZHOC5、ZHOA4和 ZH10)为萘酮衍生物,分别命名为 4,6-dihydroxy-atetralone、3,4-dihydro-3,6,8-trih ydroxy-3-methyl-naphthalenone、4,6,8-trihydroxy-3,4-dihydronaphthalen、Scytalone、5-Methoxy-1-tetralone、4,5-dihydroxy-α-tetralone、3,4-dihydro-3,4,5-trihydroxynaphthal en、3,4-dihydro-3,4,8-trihydroxy-1-naphthalenone,化合物 ZH09 为倍半蔽类化合物,命名为 1 β,4α,5β,7β(H)-guaiane-10α,11,12-triol。4.炭团菌NX9产物的生物活性检测:在5 mg/mL化合物对乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶活性抑制实验中,显示化合物ZHOB2对乙酰胆碱酯酶抑制率最高,为52.55%,IC50为5.23 mg/mL,化合物ZHOA4对α-葡萄糖苷酶抑制率最高,为30.86%。采用薄层层析法测定抗氧化活性,结果表明化合物ZHO2、ZHO3、ZHOC5与ZHOA4均具有一定的抗氧化活性。通过本论文研究,表明闽浙马尾杉内生真菌Hrpoxylon investiensNX9主要次级代谢产物为萘酮类,其中化合物ZHOB2(5-Methoxy-1-tetralone)具有较强乙酰胆碱酯酶抑制活性。本文研究结果为炭团菌NX9药用价值开发奠定基础。