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目的:
1.从红树植物老鼠筋全株制备老鼠筋醇提物,并检测其对小鼠的急性毒性反应,计算半数致死剂量(LD50),以此为后续实验的剂量设计提供依据。
2.观察老鼠筋醇提物治疗鸭乙型肝炎的疗效。
方法:
1.采用70%乙醇,以乙醇冷浸法制备老鼠筋70%醇提物。Bliss法测定其急性毒性,计算LD50。
2.观察老鼠筋醇提物抗DHBV的作用:用DHBV DNA强阳性血清(经PCR检测,琼脂糖电泳显示相应位置条带比较亮)O.2ml注射至1日龄雏鸭的腹腔,15天后用荧光定量聚合酶链反应法(FQ—PCR法)筛选出DHBV强阳性鸭,建立人工感染鸭乙型肝炎病毒的动物模型。采用分层随机抽样法将人工感染DHBV的实验动物随机分到5组。其中4个治疗组分别给予高剂量老鼠筋醇提物(2.Og/kg·日)、中剂量老鼠簕醇提物(1.0g/kg·日)、低剂量老鼠筋醇提物(0.5g/kg·日)和阳性对照药物阿昔洛韦(ACV)治疗,设1组模型对照,以双蒸水代替药物,再另设1组不做任何处理的、经PCR法检测DHBV为阴性的鸭子作正常对照,也给于等量的双蒸水。每组12只,各组雏鸭均灌胃14天。于用药前(TO)、用药后7天(T7)、用药后14天(T14)、停药后5天(P5)分别采血,采用FQ—PCR法检测血清中DHBV DNA的含量,用ELISA法测定血清中DHBsAg、DHBeAg的OD值,同时检测血清中的转氨酶(AST,ALT),最后处死动物取肝脏做病理检查。
3.数据分析:DHBV DNA、DHBsAg与DHBeAg、ALT与AST的检测数据采用重复测量资料的方差分析方法,药物对鸭肝病理影响的数据采用秩和检验进行统计分析。数据处理分析采用SPSS13.0和PEMS 3.1统计软件。
结果:
1.以19kg老鼠筋生药制备老鼠筋醇提物844g,急性毒性实验表明其对小鼠的LDso为20.04g/kg,95%可信区间为17.66~22.74g/kg,表明老鼠簕醇提物为无毒级。
2、老鼠筋醇提物抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用:
(1)用药后只有ACV组比模型对照组的血清DHBV DNA显著降低(P<0.001),而老鼠筋醇提物三个治疗组与模型对照组的DHBV DNA水平无统计学差异,故不能判定老鼠筋醇提物有直接抑制DHBV的作用。
(2)治疗后,各治疗组与模型对照组相比,血清DHBsAg、DHBeAg OD值的差异无统计学意义(P>0.05),未发现老鼠簕醇提物具有降低血清DHBsAg和DHBeAg的活性。
(3)用药后,ACV组、老鼠筋醇提物高剂量和中剂量组的ALT活性比模型对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);同时,还发现.ACV组和老鼠筋醇提物高剂量组动物的AST活性比模型对照组低(P<0.01)。表明ACV和老鼠筋醇提物具有降低ALT、AST水平,改善肝功能的作用,且老鼠筋醇提物的保肝作用与剂量大小和时间有一定的关系。
(4)肝脏病理检查发现,老鼠筋醇提物高剂量组和.ACV组对DHBV引起的肝损伤有显著的保护作用(P<0.001);其余治疗组与模型组比较,差异无统计学意义。
结论:
1.老鼠筋醇提物对小鼠的LD50为20.04g/kg,为无毒级。
2.老鼠筋醇提物对DHBV引起的肝损伤有显著的保护作用,其护肝作用与剂量大小和时间有一定的关系;未发现老鼠筋醇提物有抑制DHBV的作用。