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1、研究目的慢性应激发生时,HPA轴兴奋性提高,促肾上腺皮质激素释放激素(Cortico-trophin releasing hormone,CRH)分泌增多,引起糖皮质激素水平升高,从而动员储能,适应应激反应。若机体长期处于应激状态HPA轴功能持续亢进,高皮质酮/醇血症将对大脑海马神经元细胞造成严重损伤,继发引起海马神经元内N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)过度激活及海马神经元内糖皮质激素受体(iGR)表达减少或其活性降低,引起HPA轴负反馈功能减弱,而这将进一步加重高皮质酮/醇血症,形成一恶性循环。因此慢性应激损伤的一个重要环节即为高皮质酮/醇血症,本论文即以此为切入点,通过地塞米松抑制试验(DEXT)检验慢性应激模型是否成功,用逍遥散和GR-受体阻滞剂干预慢性应激损伤大鼠,观察其大脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA、海马神经元细胞内内糖皮质激素受体(iGR)及NR各亚型的表达状况,试图从NMDAR、GC/GR(iGR)、HPAA这一传导通路解释逍遥散对慢性应激的调控机理。2、研究方法复制慢性不可预知应激大鼠模型,运用地塞米松抑制试验加以验证,以糖皮质激素受体阻滞剂RU-38486及中药复方逍遥散干预,探讨逍遥散对慢性应激损伤大鼠的调控作用及机理:1)在前期试验基础上,复制慢性不可预计应激模型;2)取地塞米松抑制试验的大鼠血清,应用酶联免疫吸附剂测定(Enzyme LinkedImmunosorbnent Assay ELISA)检测其血清皮质酮水平;3)取慢性应激大鼠模型的各组大鼠脑部石蜡切片,以原位杂交法检测其下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotrophin releasing hormone,CRH)mRNA的表达水平;4)取慢性应激大鼠模型的各组大鼠脑部石蜡切片,以荧光免疫组化的方法检测其海马区糖皮质激素受体(intracellular GLucocorticoid receptor,iGR)的表达水平;5)取慢性应激大鼠模型的各组大鼠脑部石蜡切片,以荧光免疫组化的方法检测其海马区N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体部分亚型(NR1、NR2A、NR2B)的表达水平。3、研究结果1)在地塞米松抑制试验中,单纯慢性应激损伤组大鼠血清皮质酮水平未见明显下降,其地塞米松抑制试验呈阴性,GR受体阻滞剂RU-38486组与中药复方逍遥散组大鼠的血清皮质酮水平明显下降,其地塞米松抑制试验呈阳性;2)慢性应激损伤模型组大鼠的下丘脑室旁核CRH mRNA表达明显增多,海马神经元细胞内糖皮质激素受体(iGR)阳性表达明显降低,海马区NR1、NR2A、NR2B阳性表达明显升高;3) GR受体阻滞剂RU-38486组与中药复方逍遥散组大鼠的CRH mRNA阳性表达水平明显下降;4) GR受体阻滞剂RU-38486组与中药复方逍遥散组大鼠的海马神经元细胞内糖皮质激素受体(iGR)阳性表达水平显著上升;5) GR受体阻滞剂RU-38486组与中药复方逍遥散组大鼠的海马区NR1、NR2A、NR2B阳性表达水平显著下降。4、研究结论根据本文的研究我们可以推出以下结论:经地塞米松抑制试验检验,证实本实验所采用的慢性应激大鼠模型是成功的;逍遥散可以显著下调慢性应激大鼠海马神经元细胞中的NR1、NR2A、NR2B的表达,促进其海马神经元细胞内糖皮质激素受体(iGR)的阳性表达增加,降低其高皮质酮血症,促使其下丘脑室旁核区CRH mRNA表达下调,从而达到部分恢复慢性应激大鼠HPA轴负反馈功能的作用,起到缓减诸应激症状的疗效。