梨属于蔷薇科（Rosaceae）配子体自交不亲和性果树,而‘金坠梨’是由自交不亲和的‘鸭梨’芽变而来,是自交亲和性品种。前人研究表明,非S因子的突变导致了‘金坠梨’的自交亲和。但导致‘金坠梨’自交亲和性突变的非S因子及其作用机制均尚未有报道。因此,本研究中以‘鸭梨’和‘金坠梨’为试材,采用蛋白质组学技术,在‘金坠梨’中筛选出了与自交不亲和性相关的基因PbTM9SF3。首先,对PbTM9SF3基因进行了系统的生物信息学分析,同时并采用qRT-PCR技术对其进行了时空表达分析;其次,对PbTM9SF3基因进行了亚细胞定位;最后,通过酵母互作实验验证PbTM9SF3基因的功能,获得了如下研究结果:1.利用iTRAQ技术对‘鸭梨’和‘金坠梨’花粉蛋白进行测序,筛选出489个差异表达蛋白,其中上调表达149个,下调表达340个。生物信息学分析表明,差异表达蛋白主要参与一些代谢途径。从差异表达蛋白中筛选出PbTM9SF3基因,设计引物并在‘金坠梨’中克隆PbTM9SF3基因,其核苷酸序列全长为1782 bp。PbTM9SF3基因别称EMP70,属于一种跨膜超家族蛋白（TM9SF）。经蛋白结构域分析,PbTM9SF3基因含有1个大的非胞质区、9个跨膜区,推测其可能作为一种通道和运输小分子的运输器;由氨基酸序列比对可知,PbTM9SF3基因的序列在进化过程中高度保守;系统进化树分析表明,该基因与基因MdTM9SF3被聚类为一支,氨基酸序列同源性达98%2.实时荧光定量PCR研究发现,PbTM9SF3基因在‘金坠梨’花粉中的表达量远高于其叶片和花柱;在花粉中,‘金坠梨’的表达量远高于‘鸭梨’,表明PbTM9SF3基因与‘金坠梨’自交亲和性的改变有关。3.采用基因枪轰击的方法,将受控于CAMV 35s启动子的携带有GFP报告基因和PbTM9SF3基因的PEZS-NL载体瞬时转化进洋葱内表皮细胞中。在荧光显微镜下发现绿色荧光蛋白（GFP）存在于细胞质膜上,表明该蛋白是一个膜蛋白。4.为了验证PbTM9SF3基因在自交亲和反应中的功能,从‘金坠梨’中克隆PbTM9SF3基因、PbS₂₁-RNase基因和PbS₃₄-RNase基因,采用酵母互作的方法研究PbTM9SF3蛋白与PbS₂₁-RNase蛋白、PbS₃₄-RNase蛋白是否发生互作。试验结果显示,与AD-PbTM9SF3、BD-PbTM9SF3两个质粒共转化的酵母菌不能正常生长,提示PbTM9SF3与两个S-RNase在酵母互作中不互作。