自然界中，孤雌生殖现象在无脊椎动物和低等脊椎动物中较常见，但在哺乳动物中无天然孤雌生殖发生。科学家们通过将MⅡ期卵母细胞经体外激活并移植入受体，发现孤雌胚胎可着床并发育至体节期。普遍认为，印迹基因的异常表达与哺乳动物孤雌的发育阻滞相关。已有研究对小鼠、人、牛等物种的配子以及早期胚胎的多种印迹进行甲基化动态检测。母源印迹基因NNAT，最早发现于新生大鼠的大脑中，在神经生长和代谢调控中发挥重要作用。为探讨NNAT对孤雌发育及早期胚胎发育的影响，本研究以猪孤雌PA（parthenogenetic）胎儿和小鼠早期胚胎为研究对象，对NNAT的转录水平以及甲基化水平进行检测。本实验首先通过体外孤雌激活技术和人工授精方法分别获得怀孕28天（D28）的猪PA和正常胎儿，以及猪精子和MⅡ期（Metaphase Ⅱ）卵母细胞作为实验研究对象。通过Q-PCR（quantitative real-time PCR）和BSP（bisulfitesequencing PCR）方法比较了NNAT基因在PA和对照样品中的表达水平以及启动子的甲基化模式。结果发现，与正常胎儿样品相比，NNAT在PA样品中表达缺失（P <0.001），并且NNAT启动子为高甲基化状态。另外，NNAT启动子CpG（Cytosine-phosphateguanine）岛在正常胎儿中为部分甲基化，而在PA胎儿和MⅡ卵母细胞中几乎完全甲基化，在成熟精子中为未甲基化。以上结果表明猪NNAT启动子上的CpG岛为DMR（Differentially Methylated Regions），其高甲基化介导NNAT基因表达沉默，而这种沉默可能与早期阶段猪孤雌发育失败相关。Q-PCR检测发现，NNAT的mRNA在成年小鼠脑中表达，而在肝中无表达（P<0.001）。以脑组织和肝组织作为阳性和阴性对照，对预测的4个CpG岛进行甲基化检测。BSP结果显示，除了CpG3在脑和肝中的甲基化水平有明显差异外，其它3个CpG岛均为高甲基化水平。推测CpG3为小鼠NNAT的DMR。小鼠配子的CpG3甲基化分析表明，与NNAT在猪MⅡ期卵母细胞高甲基化状态不同，在小鼠MⅡ卵母细胞中为低甲基化水平。推测NNAT的表达模式可能存在种间差异。通过超排的方法获得小鼠受精胚胎，用KSOM进行体外培养收集不同时期胚胎，检测NNAT CpG3的甲基化水平。结果显示，以4细胞期和桑葚胚为转折点，NNAT CpG3的甲基化水平呈升高降低又升高的动态变化。而CpG3的1，2，4-6，8，10，12-14号位点在不同胚胎时期以及组织中有较明显的甲基化程度变化，推测这几个位点可能是小鼠NNAT调控区的关键位点。本研究揭示了猪NNAT启动子CpG岛高甲基化介导的基因表达沉默可能与早期阶段猪孤雌发育失败相关。并首次在小鼠早期胚胎中进行NNAT甲基化动态检测，为NNAT在哺乳动物发育中的功能研究奠定基础。