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柑橘属小型或大型长青灌木,是一种芸香科开花植物。在世界降雨丰富的国家和地区均有分布。柑橘衰退病毒(Citrustristezavirus,CTV)所引起的柑橘衰退病是柑橘产业中最具经济重要性的病毒病害。蛋白质互作对于生物学过程中细胞生理功能的正常行使具有关键性作用。病原物的侵染会对寄主造成不同水平的影响,而其致病性也取决于病毒与寄主间或病毒与病毒间一系列的蛋白质互作。本研究应用酵母双杂交技术对CTV基因组3末端编码的10个病毒蛋白之间的互作进行了分析。结果表明CTV编码的外壳蛋白(Coatprotein,CP)和P20蛋白分别存在自身的互作。CP基因编码产物为一种RNA沉默抑制子,以一种抑制细胞内寄主对病毒RNA的沉默。同时,CP基因也构成了部分CTV保守基因模块,对病毒粒子的组装和移动具有重要作用。P20蛋白为病毒无定形内含体的主要成分并参与病毒RNA的沉默抑制反应。早期的研究结果表明这两种蛋白均可以与其自身产生互作。本研究对这两个蛋白的氨基酸序列进行了截短,利用酵母双杂交技术对其自身互作区域进行了分析,并进行了GST-pulldown体外验证。结果表明,决定两个蛋白自身互作的结构域均定位于氨基酸序列的N端。其中,P20氨基酸序列中N端的1-21位氨基酸以及CP氨基酸序列中N端的41-84位氨基酸对其自身互作具有关键作用。 利用酵母双杂交技术对来源于N21、N4、S45及HB1等4个CTV分离物的CP、P20和CPm进行了蛋白质互作分析。结果表明,不同CTV分离物的CP或P20蛋白间存在异源互作反应。此外,本研究亦发现分离物N21的CPm与分离物N4的CP间亦存在互作反应。利用双分子荧光互补技术对这些蛋白质的互作进行了体内验证,结果显示,在农杆菌接种烟草(Nicotianabenthamiana)叶片72hr后,均能在烟草接种叶片表皮细胞中观察到明亮的荧光信号。本研究在P20与CP能够发生自身互作的基础上进一步揭示了其互作位点,通过酵母双杂交和GST-pulldown确定了其互作结构域。本研究结果对于揭示CTV不同分离物病毒蛋白间的异源互作以及混合侵染中病毒的致病力提供了有用的信息和线索。